北京一站式TA克隆试剂盒价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的北京一站式TA克隆试剂盒价格用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一站式TA克隆试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京一站式TA克隆试剂盒价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：20次
编号：BTN90801A
TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

成分	规格
即用型蓝白T载体(50ng/μL)	20μl
对照插入片段(50ng/μL)	5μl
T4快速连接缓冲液，2×	100μl
T4 DNA连接酶(5U/μL)	30μl
超纯水	1ml
高效感受态细胞	100μL×10只(只B型有)
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。

自备试剂：插入片段。

使用方法：

一：PCR产物的纯化和定量注意事项
1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。
2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。
4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。
 本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。
5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。

二：连接反应
1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。
2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：

成份	样品管	阳性对照管	自连对照管
T4快速连接缓冲液，2×	5μl	5μl	5μl
蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL)	Xμl(见注)	不加	不加
对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL)	不加	1.5μl	不加
T4 DNA连接酶(5U/μL)	1-1.5μL	1-1.5μL	1-1.5μL
超纯水	补到10μL	补到10μL	补到10μL

注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？
第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：

插入片段长度	与载体的摩尔比
1Kb以下	2:1或3:1
跟T载体接近(±1Kb)	1:1
比T载体长1Kb或更多	1:2或1:3

第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：

本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:

3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。
4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。

三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。
2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。
3.在冰上放置30分钟。
4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。
5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。
7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
10. 按常规方法筛选重组子。

MCS位点：


北京一站式TA克隆试剂盒价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·Southern专用DNA Marker(生物素标记)
编号：BTN120654A
英文名称：Southern DNA Marker(Labeled by Biotin)
规格：20次
本产品是用生物素标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker，可以用做Southern杂交的Marker，便于准确确定杂交片段的大小。

产品特点：
1. 即开即用，非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。
3. 如果探针用生物素标记，则必须用生物素标记的DNA Marker。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按常规方法制备琼脂糖胶和酶切基因组DNA。
2.上样。在胶的两侧的加样孔中各加入10μL本产品。
3. 按常规方法电泳。
4. EB或其他染料染色后UV 观察结果。
5.转膜。
6. 按常规的方法杂交和检测生物素的方法检测。

·包涵体大量纯化试剂盒
编号：BTN90510
英文名称：Inclusion Body Maxiprep Kit
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


北京一站式TA克隆试剂盒价格关键词：BTN90801A,一站式TA克隆试剂盒,One-Stop TA Cloning Kit(A)

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C0401 标准新生牛血清(无菌过滤)
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ARB12639 大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-βCG)Elisa分析 Rat free chorionic gonadotropin,f-βcg ELISA KIT
腺苷脱*酶 Spectinomycin HCl 9026-93-1
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·BLOTTO溶液
编号：BTN100812
英文名称：BLOTTO Solution
规格：250mL
BLOTTO全名是Bovine Lacto TransferTechnique Optimizer，是一种含有脱脂奶粉、磷酸盐和抗菌剂的杂交阻断剂，可以用于DNA杂交(Southern杂交、斑点杂交、菌落杂交)、Western杂交、ELISA；但不能用于RNA杂交和低拷贝的Southern杂交。也不能与含高浓度的SDS混用。

储存条件：低温运输、-4℃保存(不能保存在-20℃)，有效期一年。

·核酸外切酶I
编号：BTN120410
英文名称：Exonulease I
规格：750U
核酸外切酶I是单链特异性3´→5´核酸外切酶，从ssDNA的3´-OH末端分解生成5´-单核苷酸。本酶对单链DNA的特异性非常高，不分解双链DNA及RNA。

产品特点：
➤ PCR反应后残存Primer的分解，对PCR产物进行测序时，如果在反应体系中残存Primer和dNTP，测序反应则不能正常进行。使用Exonuclease I可以解多余的Primer；同时使用SAP(BTN120403)可降解多余的dNTP，之后不需要对 PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。
➤ P在反应液中去除ssDNA fragment。

产品组成：

成分	规格
核酸外切酶I(5U/μl)	150μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

贮存Buffer：Tris-HCl(pH7.5)20mM，EDTA 0.5mM，DTT1mM，Glycerol 50%。

反应Buffer(10×)：Glycine-KOH(pH9.5)670mM，DTT 10mM，MgCl2 67mM。

热失活：80℃热处理15分钟

活性定义：以热变性的小牛胸腺DNA为底物，在37℃、pH9.5的条件下，30分钟内产生10nmol的酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

纯度
1．25U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．25U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．25U的本酶和1μg的M13 mp18 ssDNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4．25U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

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