DNA嵌套缺失试剂盒折扣价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")DNA嵌套缺失试剂盒折扣价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：DNA嵌套缺失试剂盒折扣价
规格：10次
编号：BTN100213
英文名：DNA Nested Deletion Kit
品牌：百奥莱博
本产品是在Henikoff方法的基础上改良而得。最常见的DNA嵌套缺失方法是利用ExoⅢ等外切酶从线状DNA的一端连续切除核酸，最后环化得到可以转化的质粒。该方法最早由Henikoff在Putney的方法的基础上发明，其流程图如下：


产品特点：
1．不需要使用超螺旋的质粒和任何限制性内切酶，非常皮实。
2．一站式，用户只需要提供质粒，不需要单独准备其他试剂。
3．一管式，不需要任何纯化和回收的处理。
4．提供阳性对照质粒，便于在遇到困难时分析原因。
5．得到的片段可以用于侧序和蛋白结合位点的分析等试验。

试剂盒组成：

 

成份	规格
DNA聚合Buffer	1mL
DNA酶切Buffer	1mL
酶切终止Buffer	1mL
DNA连接Buffer	1mL
T4 DNA聚合酶	10μL
T4 DNA Ligase	10μL
Exo Ⅲ	10μL
S1核酸酶	10μL
对照模板质粒	10μg
超纯水	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用效果：
将5μg变性的质粒DNA与特异的引物混合，用T4 DNA聚合酶进行全长合成，然后用ExoⅢ酶切，在不同时间点取样，得到单向酶切产物，然后用绿豆核酸酶去掉单链DNA，最后用DNA连接酶将DNA自身环化，最后转化细菌。

图注：用本产品处理含有2.5 KB插入片段的质粒，两边为1Kb DNA marker。中间6条带从左到右分别为ExoⅢ处理0、1、2、3、4和5分钟的DNA(S1核酸酶处理后才上样电泳)

我公司的DNA嵌套缺失试剂盒折扣价，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·96孔板病毒DNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN131197
英文名称：Virus DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
规格：1次

·LAMP可见光染料
编号：BTN130833
英文名称：LAMP Visible Dye
规格：1mL
本产品为20×浓度的LAMP核酸染料，可以直接加入到LAMP或者RT- LAMP反应体系中，随反应进行其颜色发生改变，从而实时监测反应的进程。

产品特点：
1. 实时监测LAMP或者RT-LAMP反应进行，随反应发生其颜色发生改变。如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。
2. 使用方便，不需要开盖，不需要电泳，直接定性检测LAMP反应是否发生。
3. 灵敏度高，灵敏度跟SYBR Green I相当(但SYBR染料需要UV激发)，本产品的激发光是自然光。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将本产品放置在室温融化，然后震荡10秒钟，短暂离心后待用。
2. 将本染料按LAMP反应体系总体积的1/20加入到LAMP扩增反应液中。
以20μL体系为例：

成分	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
LAMP可见光染料	1μl	1μl
补水到	20μl	20μl

3. 观察反应液颜色变化，如果发生LAMP扩增，颜色由反应前的紫色变成天蓝色。


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·电泳级β-巯基乙醇
编号：BTN100841
英文名称：b-Mercaptoethanol，EG
规格：1.5mL
本产品是电泳级的b-巯基乙醇原液，专门用于SDS-PAGE蛋白质变性电泳。在过量b-巯基乙醇存在时(一般为5%)，它能够打开蛋白质的二硫键，使蛋白质的在SDS-PAGE胶中的泳动速度只取决于分子大小。如果没有足够的b-巯基乙醇，具有二硫键的蛋白质在SDS-PAGE电泳中的分辨率将会出现鬼带。本产品可以用于制备SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE上样液，也可以用于补充上样液中挥发的巯基乙醇。

SDS和b-巯基乙醇在SDS-PAGE蛋白变性电泳中的作用：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

β巯基乙醇还原反应示意图：



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·一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装
编号：BTN80810
英文名称：One-Stop SDS-PAGE Pack
规格：30次
SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1．一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2．安全，将实验人员接触粉末状丙*(代"烯")酰胺的可能降到最低。
3．灵活，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4．使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
分离胶缓冲液，4×	200ml
浓缩胶缓冲液，4×(含染料)	100ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
SDS-PAGE上样液，5×	1套(1mL)
SDS-PAGE电泳液，1×(干粉)	1套(20L)
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。

自备试剂：去离子水。

使用方法：
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中(注意：甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在１月内用完。
3．根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：

蛋白质大小范围(kD)	最佳浓缩胶浓度	最佳分离胶浓度
15-45	4%	15%
15-60	4%	12.5%
18-75	4%	10%
30-120	4%	7.5%
60-200	不需要	5%

注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。
4．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5．配制分离胶：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙*(代"烯")酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(单位：mL)
	水	30%AB溶液	4×分离胶配胶液
5%	5.83	1.67	2.50
6%	5.50	2.00	2.50
7%	5.17	2.33	2.50
7.5%	5.00	2.50	2.50
8%	4.83	2.67	2.50
9%	4.50	3.00	2.50
10%	4.17	3.33	2.50
11%	3.83	3.67	2.50
12%	3.50	4.00	2.50
13%	3.17	4.33	2.50
14%	2.83	4.67	2.50
15%	2.50	5.00	2.50
16%	2.17	5.33	2.50

6．配制浓缩胶(一般使用4%的浓度)：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量，丙*(代"烯")酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(mL)
	水	30%AB溶液	4×浓缩胶缓冲液(含蓝色染料)
4%	6.17	1.33	2.50

7．将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
8．分别加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
9．先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
10．由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11．拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液，用时再稀释成1×工作液。
13．在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液)，100℃煮沸3～5分钟。短暂离心，取上清上样。
14．先用10 mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15．将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。

北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购DNA嵌套缺失试剂盒折扣价。