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- 详细信息
- 技术资料
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766
- 英文名:
Imidozol Solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货2M咪唑溶液促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货2M咪唑溶液促销
产地:国产|进口
编号:BTN131222
品牌:百奥莱博
英文名:Imidozol Solution
本产品是配制好的2M的咪唑溶液,可以用于His标签蛋白纯化时洗脱His标签蛋白。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
欲了解更多北京现货2M咪唑溶液促销的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
·Denhardt溶液(同位素探针)
编号:BTN91104A
英文名称:Denhardt Solution
规格:250mL
本产品是最经典的、用于核酸膜杂交时降低膜对标记探针的非特异结合的试剂,早在Southern杂交出现前10年由Denhardt发明,该产品可用与Southern(含单拷贝基因)、Northern、非同位素杂交(B型规格),与硝酸纤维素膜、尼龙膜等各种常用的核酸杂交介质兼容。A和B分别适用于同位素和非同位素探针。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
·绿如蓝核酸染料(UV)
编号:BTN70303
英文名称:DNAgreen(UV)
规格:1.5mL
目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花*类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料
产品特点:
1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时最好还是戴上塑料手套。
使用方法之一:电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在第一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
注:显色结果:在紫外下,DNA浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。
使用方法之二:电泳后染色DNA
本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN),将凝胶放入,室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
注意:电泳后染色液可以反复使用次数。
疑难解答:
Q:本产品可否用于RNA染色?
A:可以,不论RNA是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q:为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见?
A:跟EB一样,电泳时DNAGREEN 朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有DNAGREEN的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?
A:DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:
SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL胶中加3-5μl。最佳浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?
A: DNAGREEN染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
本产品在TAE中背景最强,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q:用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?
A:SYBR染料一般与DNA的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移,使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固,则无此现象。
Q:核酸染料是否都有毒性?
A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
一是染料的膜通透性,EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。
二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。
三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。
四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之,一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。
北京现货2M咪唑溶液促销关键词:BTN131222,2M咪唑溶液,Imidozol Solution
·超级杂交液(不含甲酰胺)
编号:BTN80915A
英文名称:Super hybrid solution(formamide free)
规格:100mL
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一,应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响,用户自己摸索和优化相关条件非常繁琐,因此本公司开发了本产品,其操作流程如下:

产品特点:
1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA),也可用于和Northern杂交(靶分子为RNA),还可以用于菌落杂交,基因芯片等杂交。
2. 既可以用于同位素探针的杂交,也可以用于非同位素探针的杂交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针,也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)
4.含多种能够促进杂交的聚合物,使杂交反应能在6~12小时完成,而常规杂交反应一般需要12~24小时。
5.含多种封堵剂,能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附,能有效降低背景信号,延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺,B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成,适合Tm 较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。
7.跟各种常用的印迹膜兼容,包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。本产品属于高盐溶液,低温下产生沉淀,必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。
使用方法:
一、根据探针和靶分子的不同,分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对DNA-DNA杂交,其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明:L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是本产品中Na+的浓度,为0.75 M,16.6 ×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对DNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对RNA-RNA杂交,其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对Oligo探针杂交,Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。
二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃,一般选择68℃。
2. 对RNA-RNA或DNA-RNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃),则RNA容易降解,所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(B型本产品),以便能在42℃完成杂交。
3. 对Oligo探针的杂交,最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo较短,更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等),所以最佳温度需要适度摸索和优化。
三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃,一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。
四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的本产品跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口,再剪掉一角,留一个小口),按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保温1-2小时,延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是将探针样品在沸水浴中加热5分钟,然后迅速置冰浴中。如果是单链DNA或RNA探针,则不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定,一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为6-12小时。
六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹膜干燥。
此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低,热稳定性较差,在一定的温度和较低的离子强度下,即可洗掉。
1.杂交完毕,取出塑料袋,剪去一角,倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋,用镊子取出印迹膜,浸没于大量的2×SSC(含0.5%SDS)溶液中,室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中,在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针,则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上,吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。
疑难解答:
问题一:高背景(有或没有杂交信号)
解决方案:将放射性探针的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下;将非放射性探针的终浓度降低到30 ng/mL以下;将探针长度控制在200–800 核苷酸;减少杂交时间;适当提高杂交温度。
问题二:没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案:杂交过程中应应该连续振荡,不应该有气泡,避免印迹膜变干。将放射性探针活性提高到>5×10E8 cpm/ng,提高非放射性标记探针的终浓度;适当降低杂交温度。
北京现货2M咪唑溶液促销关键词:BTN131222,2M咪唑溶液,Imidozol Solution
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