海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)说明书

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百奥莱博专业生产销*(代"售")海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)说明书
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Marine animal DNA column extraction kit
编号：BTN130401
规格：50次
本试剂盒是在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物的基因组DNA提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA提取，可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。

产品特点：
1. 使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。
2. 操作简单安全，1小时内即可获得超纯的基因组DNA，纯化过程中不需要使用*酚*仿等有机试剂。
3. 应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。
4. 性价比高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液(20mg/mL)	1ml
溶液B	15ml
溶液C	13ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	15ml
通用洗脱液	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
使用前请先在溶液C和通用洗柱液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 切取不多于30mg的组织材料，放入装有200μL溶液A的离心管中，涡旋振荡15秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA，可加入40μL RNase A(10mg/mL)溶液(客户自备，BTN3160)，振荡15秒，室温放置5分钟。
2. 加入20μL蛋白酶 K溶液(20mg/mL)，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置，直至组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15秒。
3. 加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液B时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA 不纯。
4. 加入200μl 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 向离心吸附柱中加入500μl溶液C(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入600μl 通用洗柱液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱放回收集管中，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl 通用洗脱液，室温放置2-5分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中。注意：通用洗脱液的体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm(～13,400×g)离心2分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5 范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。

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·10nt随机引物(0.5μg/uL)
编号：BTN131227
英文名称：Octomer
规格：250
本产品为长度为10nt的随机引物，序列为5´-(NNNNNNNNNN)-3´，主要用于cDNA的合成和DNA探针标计。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

疑难解答：
Q: 随机引物的长度对cDNA合成有何影响？
A: 文献报道，长度为10个nt的随机引物合成cDNA的效果好于6nt长的随机引物。

·人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶
编号：BTN130634
英文名称：Apurinic-Apyrimidinic Endonuclease I
规格：1000U
人源脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶APE1，也称为HAP1或Ref-1，与大肠杆菌外切酶III蛋白具有同源性。APE 1水解断裂脱嘌呤/脱嘧啶位点5´端的磷酸二酯键，产生单链DNA断裂，留下3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。除具有AP核酸内切酶活性外，据报道APE1还具有弱的DNA 3´二酯酶、3´到 5´外切酶和RNase H活性。除 DNA修复活性外，APE 1还能通过一种氧化还原机制，体外调控许多转录因子的DNA结合活性。作为这个功能的一部分，APE 1已被证实能刺激Fos-Jun异源二聚体、Jun-Jun同源二聚体、Hela细胞AP-1蛋白以及包括NF-kB、Myb和ATF/CREB家族成员在内的其它几种转录因子的DNA结合活性。其反应示意图如下：


产品特点：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10³；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋；
➤ 改良切刻翻译。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl总反应体系中，37℃条件下1小时，能切割20pmol含一个单独AP位点的34 mer寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理20pmol含一个尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。


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1,4-双(5-*基-2-恶唑)* Carboxypeptidase A 1806-34-4
黄嘌呤 Novobiocin Sodium Salt 69-89-6
717阴离子交换树脂 ACHE 122560-63-8
SYBR Green 1 荧光染料 Bromophenol blue sodiu*(代"m") salt 163795-75-3
(不需DNA酶消化)"
F030412 胶体金标记山羊抗兔IgG抗体 Goat Anti-Rabbit IgG*GOLD
521-31-3 Luminol 鲁米诺
*化*溶液(1mol/L)   500ml
ARB12642 大鼠游离甲状腺素(FT4)Elisa定量检测 Rat free thyroxine,ft4 ELISA KIT
大鼠细胞分离液 Z-Asn-OH
SJ0539 Sephadex LH-60 (葡聚糖凝胶LH-60)
ARB11531 人脑源性神经营养因子(BDNF)免费代测 Human brain derived neurotrophic facor,bdnf ELISA KIT
ZCXQ01 兔血清 100ml
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)   100T|200T
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·Cre重组酶
编号：BTN130665
英文名称：Cre Recombinase
规格：50U
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶，催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列，其两端是两个13bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。


产品用途：
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。

产品组成：

成分	规格
Cre重组酶，1000 U/mL	50μl
10× Reaction Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系，37℃条件下，30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。

热灭火：70℃加热10分钟。

使用举例：
1．按下列组份配制反应液：

DNA溶液	-
10×Reaction Buffer	5μl
Cre重组酶	1μl(1U)
超纯水	Up to 50μL

2．37℃孵育30分钟。
3．70℃孵育10分钟，灭活酶活。

注意事项：
1．建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2．由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程，用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故*化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。
3．延长温育时间不会提高重组效率，相反，还可能导致大分子量重组产物的生成。
4．反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物，从而抑制重组反应。

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