北京促销M-MLV反转录酶(RNase H-)价格

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名称：北京促销M-MLV反转录酶(RNase H-)价格
编号：RFT104
规格：2000U
英文名：Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
M-MLV反转录酶(RNase H-)，是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，可以合成长片段从DNA。本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达。

M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。

M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。

产品组分：
M-MLV(200U/μl)——————2000U
5×RT buffer———————0.2ml

质量控制：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

贮存液：50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

5×RT buffer：250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl2,50 mMDTT。

失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚*(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

储存条件：-20℃。

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·Western半干转转膜液
编号：RFT079
英文名称：Western semi dry membrane fluid
规格：10×1L
本Western半干法转膜液是一种安全无毒的转膜液，没有使用剧毒的甲醇，也没有使用其它的有毒试剂。配制Western 半干法转膜液的方法非常便捷，不需要调节pH值。本Western转膜液共1瓶，可以配制1升1×Western半干转膜液，用于Western时半干法电转膜。

使用方法：
1、取一瓶可以配制1升Western转膜液的粉剂，倒入到一洁净的烧杯中，加入蒸馏水到约700毫升，溶解。
2、再加入200毫升无水乙醇或210毫升95%乙醇，混匀。
3、然后在量筒中用蒸馏水定容到1升。混匀后即可使用，无需调节pH值。没有用完的转膜液可室温或4℃保存，通常两周内使用没有任何问题。当转膜液颜色变为浅棕色或黄褐色时，应该丢弃。

注意事项：
1、配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。配制好的半干法转膜液长期存放后，如果颜色变成浅棕色或黄褐色，应丢弃。
2、需使用分析纯级别的乙醇或纯度更高的乙醇。

储存条件：室温，有效期2年。

·Western及IP细胞裂解液
编号：RFT157
英文名称：Cell lysis buffer for Western and IP
规格：100ml
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mMTris (pH7.5)，150mMNaCl，1% Triton X-100，以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
对于培养细胞样品：

1、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2.1、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：
1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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