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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验相关实验
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒(cDNA / ORF) 外源启动子(CMV、EF1α 等)驱动,表达量与内源调控完全脱钩; 通常只包含单一 CDS,不含内含子和 UTR; 表达量可达到内源的几十到几百倍; 可携带标签(FLAG、HA、GFP)方便检测。 CRISPRa(dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag) 失活 Cas9(dCas9)融合转录激活域,被 gRNA 引导至靶基因启动子区; 激活的是内源位点,转录本包含完整的内含
。它适合发现耐药基因、分化诱导因子、以及能 rescue 缺陷表型的基因,是敲除筛选的镜像补充。 --- 一、SAM 系统是怎么把基因"打开"的 CRISPRa 的基础是失活的 Cas9(dCas9)——它保留 gRNA 引导的 DNA 结合能力,但失去切割活性。在 dCas9 上融合转录激活域,就能把激活机器招募到特定基因的启动子上。 SAM 系统在此基础上做了增强,包含三个组件: dCas9-VP64:dCas9 融合 4 拷贝 VP64 激活域; MS2-P65-HSF1:一个额外的激活复合
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pAct:dCas9-VPR昆虫Cas9
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