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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。 我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大家讨论一下。 下面是我的实验过程，请高手指教，同时希望也给新手一个指导
系统表达全长开放阅读框 大肠杆菌GUS基因、人类MAP4和Eif-4E基因平行转移进目的载体，在Sf9昆虫细胞（杆状病毒）或大肠杆菌BL21-SI菌株表达天然蛋白、N-端His或N-端GST融合蛋白。在所有的系统中均观察到GUS良好的表达，而MAP4只在昆虫细胞中表达，Eif-4E只在大肠杆菌中表达。在Hartley， J.L.et al. (2000) Genome Research 10(11):1788-95 可以找到更多的细节。 为了扩展表达的选择，Invitrogen 已将
科研人必看：多肽、蛋白质、重组蛋白分不清？ 应用场景有哪些？定制如何选？
动物细胞表达：最接近天然状态的表达平台，提供完整的人源化翻译后修饰 (如糖基化、磷酸化)，适合重组抗体、细胞因子等需要复杂修饰的蛋白。 昆虫细胞表达：基因承载容量大，支持大分子量蛋白和激酶的表达。 『多种融合标签』 标签的选择直接影响纯化效率和下游应用，MCE 支持多种融合标签，可根据实验需求灵活搭配。 常规纯化标签：His 标签 (镍柱纯化，分子量小)、GST 标签 (Glutathione 亲和纯化，兼具促溶作用)、Fc 标签 (Protein A/G 亲和纯化，适合免疫相关实验)、Flag 标签
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