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    • Cell Rep:上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统

      CRISPR-Cas 系统是目前最常用的基因编辑工具,但是由于传统的 Cas 核酸酶分子量普遍太大,使其在在体基因治疗的应用中受限。近年来,为了解决这一难题,小的 Cas 核酸酶逐渐被发现和探究。其中,Cas12f 核酸酶是目前最紧凑的 CRISPR 效应核酸酶,比传统 Cas9 和 Cas12a 核酸酶小一半以上,在临床治疗应用中具有巨大潜力,然而高效的 Cas12f 基因编辑系统仍旧较少。 2022 年 9 月 27 日,上海科技大学季泉江教授团队在 Cell Reports 发表

    • 手把手教你学会 CRISPR Cas9 基因敲除技术

      CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具,可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA(guide RNA, gRNA)和 Cas9 蛋白的参与下,待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA,被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct,如需直接复制网址,可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点:基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率

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      3D)。 目前,存在多种用于哺乳动物系统中 CRISPR 基因编辑的递送方式,广泛划分为进入物理递送、基于病毒的递送,以及基于合成材料的递送。常见的物理递送方法包括显微注射和电穿孔,允许控制剂量,效率递送高,但仅限于离体递送。基于病毒的递送方式包括腺病毒、腺相关病毒和慢病毒,它们以质粒 DNA 的形式通过载体传播,具有良好的效率。基于合成材料的递送方法更安全且有高水平的控制和灵活性,但其效率要低于病毒, 递送效率受到材料的体积和阳离子性质的限制,易导致间质分散不良。 因此,改进当前的递送

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