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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
3个月
- 英文名：
MiaoLingBio
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1000
- 供应商：
淼灵生物
- 规格：
1管
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文献和实验构建 ① 设定温度梯度(26-35°C)和时间梯度(12-72 h)，对龙须菜进行高温胁迫。 ② 提取龙须菜总RNA(RNA提取按照Qiagen试剂盒说明书进行，RNeasy Plant Mini Kit，Qiagen)。 ③ 应用SMART技术构建龙须菜高温胁迫表达cDNA文库，3’和5’引物分别加接酶切位点。 4.文库筛选载体构建 将龙须菜高温胁迫表达文库cDNA双酶切，连入同样双酶切的AD 克隆质粒pGADT7中，用PEG/LiAc 转化
啦！ 呵呵，以前看到过有人把NOTCH1的intracellular domain连上GAL4-VP16，然后共转UAS-Reporter。相当于一个直接结合的报告基因系统。UAS-Reporter可以改造pG5Luc载体。 NLS序列在pACT的vp16AD或者pGADT7的gal4AD的上游处，都是SV40NLS，说明书上就有。 呵呵，我不知道常用载体里有没有不带NLS的GAL4序列。GAL4-UAS系统思路及经典文献可以参考93年development
的功能蛋白编码基因，验证反式转录调控因子的DNA结合结构域，准确定位参与特定蛋白质结合的核苷酸序列。 酵母单杂交用的cDNA文库用什么试剂盒构建? 单杂交文库可以用酵母双杂交试剂盒中的SMART试剂盒来构建 用BD公司的酵母单杂交文库构建和筛选试剂盒进行酵母单杂交文库的构建。具体操作步骤为：在15 mL试管中依次加入如下成分：20 μL SMART cDNA、6 μL pGADT7-Rec2(0.5 μg/μL，SmaI-线性化)、5 μg pHIS2-PBE
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