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3个月
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MiaoLingBio
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淼灵生物
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1管
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文献和实验shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
P22往Salmonella中导入该质粒。4、园友wuji提供的资料与建议 马里兰大学的pCVD442图谱： Propagation of the plasmid Plasmid pCVD442 and its derivatives can only grow in strains that have the pir gene encoding the Pi protein, which is necessary for replication of R6K plasmids
内切酶是切不开了。容易受甲基化影响的内切酶有：Dpn1（GA/TC）天生就甲基化；Cla1（ATC/GAT）如果前面加个 G 或后面加个 C 那么恭喜你，dam 甲基化；Xba1（T/CTAGA）如果前面加个 GA 或后面加个 TC 也是 dam 甲基化，等等有好多。这些容易甲基化的切点设计引物时一定要注意，避免引入甲基化位点。如果真是避免不了或者后来才发现问题，那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化，可以切了。甲基化缺陷型菌有：DM1、INV110、JM110
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