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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验【共享】如何检测GFP、GFP、YFP、EYFP、CFP抗体？
以及定位分析。那么该如何检测GFP其他的一些突变体，如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表达和定位呢？我们来看一下GFP标签与其它突变体标签的关系。YFP（Yellow Fluorescent Protein）是黄色荧光蛋白，其序列与GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光，也就是YFP。因此两者最大的区别则是发射波长了，在其他序列上没有区别。而EGFP是增强型的GFP，发生了双氨基酸取代，Leu（亮氨酸）取代GFP上的Phe64
细胞COS.7。具体操作参照产品说明书。48 h后检测目的基因表达或以1：20传代后加入G418(400 g／mL)筛选，每2～3天换液1次。10～14 d后抗性克隆形成，分离并扩增各单克隆细胞。分别在转染后14、28、60 d检测目的基因表达。 EGFP基因表达检测 1．荧光显微镜观察EGFP基因表达：通过荧光显微镜观察荧光细胞数及荧光强度，并摄片。 2．流式细胞仪检测EGFP基因表达：pcDNA3-EGFP.EBVR和pcDNA3.EGFP.EBNA1．MAR转染细胞48 h
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
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