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- 品系:
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- ATCC Number:
小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌
- 细胞类型:
A类
- 肿瘤类型:
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- 供应商:
上海抚生
- 库存:
37
- 生长状态:
贴壁生长
- 年限:
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- 运输方式:
低温冷藏
- 器官来源:
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否
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- 英文名:
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- 规格:
株
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 可产生抗CD3的单克隆抗体
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:
2传代。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 B类
小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌细胞总RNA的提取
1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟(观察:液体变粘稠,细胞脱壁)。
2)、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15秒。
3)、室温静置2-3分钟后,12000 rpm,15 min,4℃,离心。然后取上清无色水相(约0.6 ml)到 EP管(DEPC处理过),加0.5 ml新开的异丙醇,室温下静置10分钟。
4)、12000 rpm,10分钟,4℃,离心。观察总RNA在管底的白色沉淀,弃去上清(小心别丢了沉淀),75%乙醇1.0 ml洗涤(用DEPC水新配制)后,7500 rpm,5 min,4℃离心。
5)、去上清,点离,用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10分钟, DEPC处理水20-30 ul加入,中枪打匀,按实验方法流程60℃水浴10分钟溶解总RNA,测OD值。
6)、电泳。
小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌的操作流程:
1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度,换液培养或传代。
2. 如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞及时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡,请及时联系实验室,技术人员会跟进解决。
3. 贴壁细胞生长缓慢:适当提高血清浓度(最高不超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养。
4. 生长不均:贴壁细胞若出现生长不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重新打散细胞,加入新鲜培养基进行培养。
细胞周期的概念:
细胞周期是可再生细胞从准备时期到分裂为两个细胞的一个循环阶段。
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期,细胞间期较长,而细胞分裂期较短。
FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。
本公司所经营产品均为科研产品,为科研实验使用,小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌不得用于人体注射,服用等,望注意,谢谢合作!
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Anti-DACH2 转录调节因子DACH2抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
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Vimentin 英文名称: 波形蛋白抗体 0.1ml
phospho-DOK1 (Tyr398) 英文名称: 磷酸化D酪酸激酶衰减蛋白1抗体 0.1ml
Anti-phospho-ALK/CD246(Tyr1586) 磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
小鼠杂交瘤细胞(抗CD3);OKT3品牌Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗小鼠k链 0.1ml
FMDV Polyprotein (3D polymerase) 英文名称: 口蹄疫病毒 0.2ml
细胞色素P450单氧化酶抗体 Anti-CYP450 0.2ml
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Rhesus antibody Rh Phospho-Tyk2(Tyr1054/1055) 磷酸化非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体 规格 0.1ml
Goat Anti-bovine IgG/FITC 荧光素标记羊抗IgGMulti-class antibodies规格: 0.3ml
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文献和实验【原创】实验方法分享:用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗
(PBS+1M NaCL,pH7.5-8) 的缓冲液置换0.3ml该品牌rProteinA填料的storage buffer。 2,用binding buffer等体积稀释小鼠腹水1ml(15ml离心管),10000RPM离心15分钟 3,取离心上清,把步骤1中的填料加入,室温在摇床上晃匀5-60分钟(时间越长,温度37度,能提高抗体和填料的结合率,此次实验中就晃了5分钟,导致流穿中还有一点点抗体残留;) 4,3-5000RPM离心1-3分钟,沉降填料,吸去上清(流穿) 5,加入10
,无菌复溶 9. 淋巴细胞M密度梯度分离液(Accurate Chemical and Scientific),室温 10. RPMI-10完全培养基 11. FITC标记的抗CD3抗体和PE标记的PK136抗体(PharMingen) 12. 15ml和50ml带盖聚丙烯锥底离心管 13. Beckman CS-6R离心机(或同类离心机) 14. 血清学吸管 实验方法: 1. 处死小鼠,无菌取脾脏。 2. 制备脾脏
―杂交瘤技术、DNA重组技术等。 单抗的制备首先将抗原注射人小鼠体内,然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B细胞,与小鼠骨髓瘤细胞在灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导下融合,再在特定的选择性培养基中筛选出杂交瘤细胞。由于杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质,因此,它不仅具有B细胞分泌特异性抗体的能力,还有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的本领。由此可以获得足够数量的细胞。 单抗的制备过程 1,抗细胞表面分子的单抗 这类抗体能识别和结合表达特定膜表面分子的细胞
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