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- 2025年07月12日
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深圳普瑞金生物药业有限公司
- 服务名称：
纳米抗体的开发
| 步骤 | 服务内容 | 周期 |
| 免疫羊驼 | 1. 准备羊驼。 2. 免疫5-6次，免疫方案需要提前沟通。 3. 采集羊驼血清，包被免疫原，采用ELISA方法检测效价。 4. 如果客户根据效价检测结果同意建库，取外周血，准备建库。如果客户不同意建库，项目停止。 |
10-12周 |
| cDNA 模板制备 |
1. 高质量提取RNA。 2. RT-PCR制备cDNA。 3. 用特异的引物PCR扩增鉴定cDNA质量。 |
1周 |
| 构建噬菌体库 | 1. 设计和合成抗体可变区兼并引物。 2. PCR 扩增抗体重链可变区基因。 3. 酶切、连接VHH基因和噬菌粒载体，高效电击转化TG1宿主菌，构建可用有效的抗体库。 4. 随机挑选＞20个克隆，PCR鉴定阳性率，测序和分析抗体序列。 |
3-4周 |
| 筛选鉴定 |
噬菌体库筛选
1.噬菌体筛选后纳米抗体库的构建，PCR鉴定阳性率。
2.可直接表达（Ecoli）的单克隆纳米抗体的筛选，测序和分析抗体序列。
3.纳米抗体的人源化和功能再鉴定（可选）
|
2-4周 |
| 构建表达载体 | 1. 合成抗体基因。 2. 构建VHH真核表达载体。 |
1-2周 |
| 表达、纯化 | 1. 无内毒素提取大量质粒。 2. 分泌表达VHH抗体，收集培养基上清。 3. 亲和层析纯化VHH抗体。 4. SDS-PAGE电泳。 5. ELISA检测活性。 6. 其他（据要求） |
2-3周 |
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文献和实验在骆驼科动物外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体，该抗体只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的 CH2 与 CH3 区，不像人工改造的单链抗体片段 (scFv) 那样容易相互沾粘，甚至聚集成块。单独克隆并表达出来的 VHH 结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH 晶体为 2.5nm，长 4nm，分子量只有 15KDa，由于其尺寸处于纳米级别，也被称作纳米抗体（Nanobody，Nb），听名字就很牛 B
纳米抗体 (nanobody,Nb)， 即重链单域抗体 VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody) ，该类抗体只包含一个重链可变区 (VHH) 和 CH2，CH3 区，相比于其他抗体，轻链天然缺失。纳米抗体晶体直径 2.5nm，长 4nm，是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。 纳米抗体类型纳米抗体和传统抗体的优劣对比 性能 传统抗体 纳米抗体 抗体
三句话读懂一篇 CNS：汉堡薯条甜饮料，如何引发糖尿病？生病时发烧、没胃口的背后原因找到了
。 该研究报道了建立了基于纳米抗体的天然膜蛋白复合体表达与活性检测新方法，并发现代谢型谷氨酸受体（mGlu）异源二聚体在脑组织中高比例表达，提示了以 mGlu2-4 异源二聚体作为药物靶点的药物开发新策略！ 图 8：来源 Nature Chemical Biology 9. 细胞代谢：糖脂信号激活去泛素化酶调控细胞能量稳态 肥胖和糖尿病极大地危害人体健康，其发病机理不明。 2022 年 6 月 7 日，北京大学基础医学院尹玉新教授团队和山东第一医科大学宋勇峰教授团队合作在 Cell
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