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- 2025年07月15日
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深圳普瑞金生物药业有限公司
采用自体外周血细胞中分离得到的单个核细胞再经分离纯化得到T细胞，病毒转染后经体外操作使CART 细胞扩增活化，回输体内以达到杀灭肿瘤细胞目的的一种体细胞治疗方法。
（1）每个试剂盒提供为三名患者制备临床研究所需CD19-CART细胞的所有核心试剂；
（2）符合临床前功能验证数据；
（3）同时提供一套成功测试的CART细胞扩增的标准流程，供临床研究单位参考。
试剂组成
（1）高滴度CAR-CD19慢病毒载体（GMP级，可选）；（2×106×10）/感染滴度=病毒量/孔
（2）RetroNectin®GMP grade ：500ul（-80℃）
（3）Anti-CD3 mAb GMP grade ：150ul （-80℃）
（4）CD3 MicroBeads human； ：100ul
（5）Ficoll-PaqueTMPLUS ：2瓶 100ml/瓶
（6）Ethylenediaminetetraacetic acid ：500ul
（7）Hexadimethrine bromide（GMP级）； 35ul （Polybrene）
（8）注射用重组人白介素-2 :18瓶 （100万单位）
（9）注射用重组人干扰素γ ：9瓶 （200万单位）
（10）X-VIVOTM15培养基（无酚红）：3瓶 1000ml/瓶
（11）人血白蛋白 20% ：80ml 50ml/瓶
（12）0.9%Nacl ：10瓶 500ml/瓶
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文献和实验-132-997）进行进一步纯化以满足测序要求。 FFPE 样本（福尔马林固定石蜡包埋）：甲醛固定导致蛋白质和核酸发生交联和片段化，无法用于制备活细胞。此类样本同样可以使用商业化试剂盒（130-134-089）分离细胞核进行 snRNA-seq 或使用解离试剂盒（130-118-052）解离分选后进行基因组分析。 自动化样本解离制备细胞平台 （1）传统细胞制备方法的局限性 传统的样本制备方法，尤其是对复杂实体组织（如肿瘤、脑组织、纤维化组织）的处理，长期以来严重依赖手动操作。手动解离
，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
筛选。有了优化的流程、预先配制的试剂盒以及一次性芯片，您能够通过“上样即运行(load and go)”来实现单细胞准确性。 C1 系统的工作流程如下：首先通过移液操作，将溶液中的细胞样品加在C1微流体芯片上， C1 系统在输入的指令下会快速自动分离出 96 个单细胞并分配到单个制备仓中;之后，研究人员可选择一个内控点验证捕获细胞的数量、区分死细胞和活细胞以保持数据的完整性;随后，在芯片上进行细胞裂解、RNA反转录及预扩增，整个过程无需任何手动的溶剂混合及样品转移操作。最后，预扩增的cDNA
