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- 2025年12月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶
- 库存：
9999
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
科研试剂
组分
组分名称 数量
Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase (20pmol/μl) 20μl
10×App DNA/RNA Ligase Buffer 100μl
50 mM MnCl2 100μl
应用
二代测序文库构建中连接单链DNA和腺苷化的DNA接头。
构建小RNA二代测序文库，可在较高温度下连接预腺苷化的接头和RNA。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
1. 1× AppDNA/RNA Ligase Buffer：10mM Bis-Tris-Propane- HCl pH 7.0,10mM MgCl2,1mM DTT。
2. 该酶只能连接5’-端预腺苷化的Oligo接头到单链DNA或RNA的3’-OH基团
3. 当腺苷化底物的5’-端第一个碱基为“C”时，连接效率较差。
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文献和实验更高的长 cDNA（ 为了进一步改善 cDNA 合成，MMLV 反转录酶经过改造具有更低的 RNase H 活性（即 RNase H Minus，将 RNase H 结构域进行突变）、更高的热稳定性（高达 55℃）和更强的持续合成能力（65 倍以上）。这些属性改变可增加 cDNA 长度和产量，提高灵敏性，改善抑制剂耐受性，并缩短反应时间（表 2）[4]。 表 2. 常用反转录酶及其属性 四、引物选择 为了启动反转录，反转录酶需要一种短 DNA 寡核苷酸（即引物）与其互补序列在 RNA
的扩增。 连接酶链反应是 Backman 1997 年为检出靶基因序列中的点突变而设计发明，并申报了专利。1988年 Landegren 也进行了该项研究。1988 年 Backman 等又因分离热稳定的连接酶，而申报专利，1991年 Backman 和 Barany 分别用耐热 DNA 连接酶进行了 LCR 试验。耐热 DNA 连接酶可以在热循环中保持活性，提高连接反应的特异性，排除了背景扩增和免除了不断补充酶的繁琐程序。 LCR 的基本原理为利用 DNA 连接酶。特异地将双链 DNA 片段
热稳定性聚合酶（1，2）产生PCR产物提供一个匹配碱基。如表1总结的，这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸（3，4）。pGEM®-TEasy高拷贝数载体包含有T7和SP6RNA聚合酶启动子，其侧翼和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base®系统（产品目录号#E5750）产生一系列巢式缺失
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