mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterM

TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶，而逆转录活性较Tth DNA聚合酶大幅提高，在优化的反应Buffer中，TTx表现出卓越的RT-PCR特性，但TTx DNA Polymerase的活性仍然依赖于对PCR有抑制活性的Mn2+，这种专用的反应Buffer系统限制了TTx应用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术，改变了TTx的活性配体中心，使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差，这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统，增加了其应用的拓展性，使得多种类型的实验得以实现，包括：采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。
主要特征
依赖于DNA模板的聚合酶活性；
5'-3'外切酶活性，用于TaqMan探针切割；
金属配体离子为Mg2+，通常使用浓度2-3.5mM；
可以有效的使用dUTP，建立防污染体系；
相比于TTx DNA聚合酶，mTTx的耐热性能有所下降，92℃条件下的半衰期为30min；
热启动版本的mTTx在50℃条件下100%无活性，92℃加热5min后恢复活性。
单位定义
一个活力单位即在在68°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年，避免反复冻融。
使用方法（以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix为例）
1. 按以下组分配制RT-qPCR反应液
2×mTTx MasterMix                                             10 μl
上游引物（10 μM）                                             0.4 μl
下游引物（10 μM）                                             0.4 μl
荧光探针（10 μM）                                             0.2 μl
RNA                                                                        X μl
ddH2O                                                        Up to 20 μl
注意：引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。
2. Direct One-Step RT-PCR程序
92℃      5 min (热启动)
60℃      5 min (逆转录)
92℃     10 s 
60℃      30 s（收集信号）  循环35-45次
注意：mTTx的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-70℃调整。