30％丙稀酰胺溶液(19:1) 蛋白质研究

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名称：30％丙稀酰胺溶液(19:1) 蛋白质研究
规格：100ml
编号：RFT064
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
30%丙稀酰胺(19:1)即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的质量比例为19:1。常用于配制丙*(代"烯")酰胺凝胶(PAGE胶)，常用于核酸的分离以及测序胶的制备。

储存条件：4℃，避光。

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·DH5α化学感受态细胞
编号：RFT166
英文名称：DH5α Competent cell
规格：20×100μl
本公司生产的DH5α感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达10^8cfu/μg。
基因型：supE44△lacU169(j80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的 b-半乳糖苷酶*基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

储存条件：-70℃，有效期6个月。

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