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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
长期供应
- 细胞类型:
原代细胞
- 品系:
原代细胞
- 组织来源:
人
- 相关疾病:
否
- 物种来源:
人大小鼠
- 免疫类型:
见说明书
- 细胞形态:
悬浮
- 器官来源:
见说明书
- 运输方式:
低温运输
- 年限:
5-470年
- 生长状态:
贴壁生长
- 规格:
465 x 10^5 cells/vial
1、细胞名称:A875;人黑色素瘤细胞
2、生长特性: □ 贴壁 □ 悬浮 □悬浮+贴壁
3、细胞生长条件:
| 培养条件 | 90%DMEM+10% FBS+1%双抗 |
| 温度 | 37℃ |
| 空气条件 | 5% CO2,95% AIR |
| 传代方法 | 1:2传代,2~3天换液 |
| 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO |
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
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文献和实验B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的,不过中科院说不清,我也就说不清了。总之是B16。细胞总的来说比较好养,操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养,一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了,细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青,感觉不灭活比灭活要好养一些。传代操作,主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养,但是及时换液,否则也很容易死亡、或变形。消化用胰酶0.25%,可以用含EDTA的,效率更高一点。消化步骤:弃血清——用D-hank's
(IF 28) 揭秘黑色素瘤细胞新状态!剑桥大学癌症研究中心最新合作文章揭示强大的基因表达程序是状态转变的基础
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黑色素瘤治疗最新发现:维生素 D 能抑制 Wnt/beta-catenin 信号通路,降低癌细胞的侵袭能力
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