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- 详细信息
- 文献和实验
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99
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北京诺博莱德科技有限公司
产品简介:
非洲爪蟾分裂间期卵细胞提取物是体外细胞活动重建实验中细胞质和细胞器成分的主要来源,可进行去膜精子染色质的核组装、核蛋白的输入以及DNA的复制。NobleRyder改良Barth溶液(无钙)主要由氯化钠、KCl、碳酸氢钠、HEPES、硫酸镁等组成,不含Ca2+,主要用于漂洗卵母细胞。
产品组成:
| 编号 名称 |
C6867 | Storage |
| 改良Barth溶液(无钙) | 500ml | 4℃ |
| 使用说明书 | 1份 | |
操作步骤(仅供参考):
1、根据实验具体要求操作。
注意事项:
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
改良Barth溶液(无钙)
有效期: 6个月有效。
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文献和实验(pH8.0) 25mmol/L EDTA(pH8.0) 0.3mol/L NaCl 2% SDS d)用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物,再将其注入聚丙烯管内。重复3-4次,剪切DNA。 c)加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml,充分混匀后置于37℃温育30分钟。 蛋白酶K以贮存液的形式保存,贮存液为20mg/ml 蛋白K溶液。 b.悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 a)于4℃以2000g离心5分钟收集细胞,以10倍体积用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲液悬
液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上,再将铝板置于冰盘上。 (2)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液, 并使之遍布整个平板的表面。 RNA提取缓冲注液 0.14mol/L NaCl 1.5mmol/L MgCl2 10mmol/L Tris.Cl(pH8.6) 0.5%NP-40 1mmol/L二硫苏糖醇(DTT) 100单位/ml胎盘RNA
6)亦可。细胞在使用前应进行有无支原体污染的检查。 培养液:应根据试验所用系统和细胞类型来选择适宜的培养基。对于 V79和 CHO 细胞,常用最-低必需培养基(MEM,Eagle)、改良 Eagle培养基(DMEM)加人10%胎牛血清和适量抗菌素。对于 TK6 和 L5178Y细胞,常用 RPMI 1640培养液,加人10%马血清(培养瓶培养)或20%马血清(96孔板培养)和适量抗菌素(青霉素、链霉素)。 胰蛋白酶/EDTA溶液:用无钙、镁 PBS配制,胰酶的浓度为0.05 %,EDTA 的浓度
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