北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体厂家

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北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体厂家是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多pUM19-T Vector TA克隆载体等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体厂家
编号：SY0295
产地：国产|进口
规格：1μg
品牌：百奥莱博
pUM19-T载体是一种用于PCR产物高效克隆（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。经特殊工艺改造后，使其具有较高的克隆效率：

1）特殊的纯化方式使得超过99% 的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。
2）由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’ 端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。
3）pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。

产品组份：
pUM19-T Vector (50 ng/μl)————20 μl
500 bp control insert (50 ng/μl)————20 μl

使用说明
1. 将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。
2. 按下表配制连接反应体系：

 

ddH2O	To 10 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1μl (约0.025 pmol)
插入片段*	0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3. 对照反应体系（可选）：

ddH2O	6 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)	1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5. 转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10min。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 连接使用的PCR 片段3’ 端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase (SY0036)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。
3) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

附1：pUM19-T 载体结构


储存条件：-20℃。

我公司的北京现货pUM19-T Vector TA克隆载体厂家，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
ARB10024 人5羟色胺(5-HT)代做ELISA实验 Human 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
考马斯亮蓝快速染色液 
ARB12214 大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)酶标法分析 Rat carnitine-acylcarnitine translocase,cact ELISA KIT
ARB11030 人阿米巴(AmebIAsIs)酶免分析 Human amebiasis ELISA KIT
PY02-054  高盐察氏培养基  250克  
ARB11580 人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA检测服务 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4,timp-4 ELISA KIT
ARB10925 人芳基硫*(代"酸")酯酶A(ASA)代做ELISA实验 Human aryl sulfatase a,asa ELISA KIT
ARB13085 小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)elisa检测 Mouse Histone deacetylase,hd ELISA KIT
ARB11905 人黏着斑激酶(FAK)含量分析 Human focal adhesion kinase,fak ELISA KIT
PIPES溶液  1mol/L 100ml
PY02-175  制霉素检定培养基  250克  
BL1188 0.5M EDTA(PH8.0)
003003 猪血浆 100ml|500ml
嘧啶 Diacetyl monoxime 289-95-2
ARB11839 人凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA检测服务 Human coagulation factor Ⅷ related antigen,fⅧ-ag ELISA KIT
ARB10883 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)检测服务 Human tartRate-resistant acid phosphatase 5b,tracp-5b ELISA KIT
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PY01-042  牛磺酸  25克  
ARB11538 人高铁血红蛋白(MHB)ELISA检测服务 Human methemoglobin,mhb ELISA KIT
ARB10953 人肝细胞生长因子受体(HGFR)酶免分析 Human hepatocyte growth factor receptor, hgfr ELISA KIT
ARB10255 人二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)血清中含量检测 Human secondary lymphoid-tissue chemokine,slc ELISA KIT
尿素溶液(9.5mol/L)   100ml
SJ0191 Dextran T-70  葡聚糖 T-70
ARB12320 大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)尿液中含量检测 Rat low-density lipoprotein-receptor-related protein,lrp-1 ELISA KIT
HC0052 (带刻度)袋装吸头
ARB11709 人黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)定量分析 Human melanoma metastasis surface adhesion molecule,mmsam ELISA KIT
ARB13024 小鼠肝细胞生长因子(HGF)含量检测 Mouse hepatocyte growth factor，hgf ELISA KIT
CYB163063 兔抗狗IgG-FICT
ARB10300 人不透光相关蛋白(OPAs)elisa测定使用说明书 Human opacity-associated proteins,opas ELISA KIT
丽春红S Lysozyme chloride 6226-79-5
PY01-183  *酚红  ind  25克  
DL3000 DNA Marker Urokinase
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·Hoechst 33342染液(即用型)
编号：SY0499
规格：10ml
本系列产品均以溶液形式提供，其中Hoechst 33342染液(1mg/ml)（SY0563）为特定浓度的产品，其浓度为1mg/ml。用于细胞核染色时，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。Hoechst 33342染液(即用型)（SY0499）为浓度经过优化的产品，确保可以满足各种常规染色的需要。

Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

中文名称：二*甲亚胺, 三*化* 2-(4-乙基*基)-5-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基)-2,5-二-1H-*并咪唑
英文名称：2’-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93 
CAS：23491-52-3 
纯度：≥95%（HPLC）
储存条件：4℃，有效期6个月
结构式


使用方法
1. 用PBS或合适的缓冲液制备 10～50µM Hoechst33342染色液。
2. 固定的细胞或组织染色：
对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
b) 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
c) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

3. 活细胞或组织染色：
a) 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
b) 在 37℃培养细胞 10～20 分钟。
c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

注意事项
1) Hoechst 33342 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2) 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3) 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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