北京2×Pfu MasterMix(含染料)哪里卖

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名称：2×Pfu MasterMix(含染料)
编号：WE0108
英文名：2×Pfu MasterMix(With Dye)
品牌：百奥莱博
规格：5ml
  本品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

产品组成：

 

组份	1ml	5ml
2×Pfu MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Pfu MasterMix含有Pfu DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Pfu MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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编号	名称
WE0125	高保真多重PCR Mix(下一代测序用)
WE0202	新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0290	G250蛋白快速染色试剂
WE0308	高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
WE0194	病毒RNA提取试剂盒
WE0205	磁珠法DNA纯化回收试剂
WE0165	酵母质粒提取试剂盒
WE0282	多彩预染蛋白Marker
WE0330	抗His标签抗体琼脂糖介质
WE0110	2×Babuddy MasterMix(含染料)
WE0107	Pfu DNA Polymerase
WE0259	蛋白酶抑制剂混合物
WE0147	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)
WE0343	抗V5标签单克隆抗体
WE0144	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)
WE0145	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)
WE0404	RNA样本保存液
WE0379	RRX标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
WE0253	BL21(DE3)感受态细胞
WE0161	寡聚核苷酸Oligo(dT)15
WE0398	游离DNA样本保存管(10ml)
WE0367	罗丹明标记驴抗小鼠IgG(H+L)
WE0159	dNTP混合溶液(10 mM)
WE0315	免疫组化试剂盒(鼠源一抗)
WE0118	结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
WE0280	蛋白分子量Marker
WE0146	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(高含量ROX校正染料)
WE0142	快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)
WE0381	Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0134	SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料)
WE0215	5×TBE
WE0376	HRP标记山羊抗人IgM(Fc5μ)