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- NobleRyder
- N6822
- 北京
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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99
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12个月
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件：
已收到实际货物为准
产品简介：
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，自身易形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。
NobleRyder Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。
产品组成：
| 编号 名称 |
N6822 | Storage |
| 试剂(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 1ml | -20℃ |
| 试剂(B): Nuclease-Free Water | 5ml | RT |
| 使用说明书 | 1份 | |
操作步骤(仅供参考)：
1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM，同时溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混匀备用
2、 按如下退火反应体系操作：
| N uclease-Free Water | 40μl |
| Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) | 20μl |
| DNA oligo A(50μM) | 20μl |
| DNA oligo B(50μM) | 20μl |
| Tatal | 100μl |
3、 按如下PCR仪的退火条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 作用 |
| 1 | 95℃ | 2min | Oligo充分变性 |
| 2 | 每90s下降1℃，降至25℃ | 约90min | 程序退火 |
| 3 | 4℃ | 长期保存 | 暂时存放 |
4、退火后可直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项：
1.避免反复冻融，以免效率下降。
2.该试剂只适合于DNA oligo的退火，不适用于RNA oligo 的退火。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
DNA退火缓冲液(5×)
有效期： 12个月有效。
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文献和实验PCR定义PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。PCR技术的基本原理一、PCR反应成分：1、模板DNA；2、引物；3、四种脱氧核糖核苷酸；4、DNA聚合酶；5、反应缓冲液
，即可固定DNA 。 3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择： 带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度( SSC )，但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ，共价结合DNA 是最大优点。 硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC )，低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失， pH>9 ，DNA 不能与膜结合。 4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs
写得真不错）引物设计方面还有很多话题可说，比如如何利用引物搭桥将两个片段通过PCR 而不是酶连接起来、如果要设计引物表达蛋白时注意“N 端规则”??这些有趣的话题可以见论坛内相关讨论，这将是我们推出“原核表达”专辑时的内容。PCR 成分 引用《分子克隆3》提供的PCR 标准反应条件： 模板 1pg-1μg 引物 1μmol/L DNA 聚合酶 1－5 单位 Mg2＋ 1.5mmol/L dNTPs 200μmol/L KCl 50 mmol/L 一、模板 模板可是PCR 的关键，模板
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