北京现货三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的北京现货三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒销*(代"售")，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：北京现货三日疟原虫荧光PCR检测试剂盒销*(代"售")
等级：科研试剂
产地：国产|进口
规格：48次/盒
品牌：百奥莱博
一、简介：
本试剂盒用一对三日疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行三日疟原虫的检测。

二、用途：
本试剂盒可用于三日疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于三日疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T/ Kit)
组份 数量 规格
三日疟原虫荧光PCR 反应液(qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
三日疟原虫阳性对照(PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。

六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸*或EDTA2Na抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(三日疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明三日疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明三日疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行三日疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明三日疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对金黄色葡萄球菌肠毒素B特异性引物，对金黄色葡萄球菌肠毒素B DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)，用于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
金黄色葡萄球菌PCR反应液(SEB-PCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 106copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 105copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 104copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 103copies/μL) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10-2010)要求进行。
6.1.2 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.2.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.2.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(SEB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(SEB-PTC103、104、105、106、107copies/μL)5μL(建议由低浓度向高浓度顺序加入反应液，避免高浓度阳性对照品污染反应液)，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(SEB-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明SEB核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明SEB核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行SEB qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明SEB核酸阳性；否则判为样本阴性。
（5） 标准曲线相关系数数值介于0.97~1之间。(相关系数数值等同于r2值)，根据斜率及Y轴截距列出计算公式，并通过标准曲线计算样品RNA含量拷贝数。
例如：Y轴截距=41.5 斜率=-3.83
公式为：Y=-3.83(logX)+41.5

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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