p53凝胶迁移探针(1.75μM) 凝胶迁移EMSA

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北京百奥莱博专业生产销售p53凝胶迁移探针(1.75μM) 凝胶迁移EMSA，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：p53凝胶迁移探针(1.75μM) 凝胶迁移EMSA
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：YT238
规格：60μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的p53consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的p53结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约30个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行20个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行30-60个冷竞争反应。

p53 consensus oligo的序列如下：
5"-TAC AGA ACA TGT CTA AGC ATG CTG GGG ACT-3"
3"-ATG TCT TGT ACA GAT TCG TAC GAC CCC TGA-5"

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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·RNase A (10mg/ml)(不含DNase)
编号：YT005
英文名称：Ribonuclease A（DNase free）
规格：1ml
本品用于消化RNA，浓度为10mg/ml,不含DNase，可直接使用。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验。
储存条件：-20℃。

·NP-40裂解液
编号：YT613
英文名称：NP-40 Lysis Buffer
规格：100ml
本品是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。

NP-40裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·双萤光素酶报告基因检测试剂盒
编号：YT273
英文名称：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
规格：100次|1000次
本试剂盒是先以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶，后以肠腔素为底物来检测海肾萤光素酶，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。

试剂盒组分：

报告基因细胞裂解液	60ml
萤火虫萤光素酶检测试剂	10ml
海肾萤光素酶检测缓冲液	10ml
海肾萤光素酶检测底物(100×)	100μl

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考下图。


双萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣
基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

注意事项：
1. 加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
2. 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
3. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4. 为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
5. 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
6. 海肾萤光素酶检测底物(100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100μl，并混匀后即可使用。
7. 海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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