BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)品牌
规格：50次
英文名：Two-Tube RT PCR Kit
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN80206
本试剂盒是整合cDNA第一链合成试剂和即用型PCR 试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA第一链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。

产品特点：
1. 即开即用，足够50次RT反应(20μL体系)和600次PCR反应(30μL体系)。
2. cDNA第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或基因专一引物，适合各种情况。
3. PCR试剂盒具有即用、简单等优点，PCR mix中含上样染料，所以PCR产物可以直接上样电泳。
4. 两管式操作，RT和PCR在不同试管中进行，便于单独优化RT反应或PCR反应条件。
5.扩增效率高，最长可扩增5Kbp以上的RNA。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV 逆转录酶(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
随机引物(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free 水	10ml
PCR MagicMix 3.0	9ml
专用染料	360μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、样品RNA的制备(本试剂盒不提供相关试剂)
1、可用自本公司各种RNA提取方法提取样品的RNA，也可以选用其他供应商的产品，但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超纯水中。

二：RT(逆转录)反应合成cDNA
1. 按下表配制RT反应体系(20μl体系):

RNA模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500 ng
或专一的RNA(如体外转录制备的)	0.01pg-500ng
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μL
或随机引物(0.2μg/μL)	1μL
或自备模板专一反向引物(10pmol/μL)	1-2μL
RNase-free水	补水到12μL

注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。随机引物与RNA 模板的比例将决定cDNA 合成的平均长度(成反比)。一般情况下随机引物效率好于OligodT引物，但如果只想转录总RNA中的mRNA(只占5%左右)，则可优先选用OligodT引物，这样就可以排除非mRNA的干扰。
2. 70℃保温5分钟变性模板后立即冰浴。
3. 按顺序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μl。
4. 42℃保温60分钟。此步为RT反应。
5. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。剩余样品可以放置在-20℃长期保存。

三、PCR(30μL体系)
1、将全部专用染料加入到PCR MagicMix 3.0中，轻柔颠倒混匀即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加专用染料，但在PCR结束后，电泳上样前，则需要加入电泳上样液，否则电泳时没法判断电泳速度。
2、在PCR 管中加入下列成分：

成份	加入量
PCR MagicMix 3.0(已加染料)	15μl
cDNA样品(上步的RT反应液)	1-5μl
模板专一性正向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
模板专一性反向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
补水到	30μl

注意：cDNA 也可以稀释后用作PCR 模板。是否稀释或稀释多少倍完全取决于靶基因的丰度。
3、PCR反应参数(需要根据模板和引物决定，下面的只做参考)：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5min
PCR反应(35个循环)	94℃	1min
	55℃	1min
	72℃	2min
最后延伸	72℃	10min

四、电泳检测
取5-0μl PCR产物直接在PAGE或琼脂糖凝胶上电泳，跟分子量标准比较估计出扩增产物的大小。
注：本试剂盒中的PCR mix含有甘油和染料，可以直接上样，不需要额外再加电泳上样液。

我公司的BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·Baker甲醛*中性固定液
编号：BTN131276
英文名称：Baker Fixative Solution
规格：250mL
本产品主要成分为中性甲醛水溶液和10%*化*。本固定液为组织和细胞化学技术中最常用的固定液之一，适合各种染色方法。本产品固定时间2～4小时，温度0～4℃。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·细胞计数液(Vi-CELL)
编号：BTN131200
英文名称：Cell Counting Reagent(Vi-CELL)
规格：100次
本产品主要成分为中性甲醛水溶液和10%*化*。本固定液为组织和细胞化学技术中最常用的固定液之一，适合各种染色方法。本产品固定时间2～4小时，温度0～4℃。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·HRP标记亲和素
编号：BTN131086
英文名称：HRP-Avidin
规格：2mg
本产品为辣根过氧化物酶标记的亲和素干粉，每摩尔亲和素含有1-2mol辣根过氧化物酶，结合能力为5-10μg生物素/mg蛋白≥80过氧化物酶单位/mg蛋白。本品常用在内源磷酸酶会对实验造成影响的免疫组化中使用以及免疫印记。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·抑*肽酶溶液(5mg/mL)
编号：BTN130536
英文名称：Bestatin Solution
规格：5mL
本产品为5mg/mL抑*酶的甲醇溶液，工作浓度为40μg/mL(130μM)。抑*肽酶(Bestatin)，又称*肽酶抑制剂、乌*美司(ubenimex)，分子量是308.4，是一种竞争性的蛋白酶抑制剂，可抑制*肽酶B、白*酸*基肽酶、三肽*肽酶和哺乳动物细胞表面的*基肽酶等蛋白酶的活性，不能抑制羧肽酶。

储存条件：低温 运输，-20℃保存，有效期一年。


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·细菌专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130526
英文名称：Protease Inhibitor for Bacteria
规格：1mL
本产品是由6种独立的蛋白酶抑制剂(不含EDTA)按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解各种细菌样品时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白降解，从而有效地提高蛋白质得出率，同时不使样品本身的性质发生改变。本品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、丝*酸半胱*酸蛋白酶、*肽酶，半胱*酸蛋白酶和天冬*酸蛋白酶等各种蛋白酶活性。本产品与各种细菌裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

产品特点：
1．即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2．含有AEBSF 、Aprotein、Bestatin、E-64、Leupeptin、pepstatin A等蛋白酶抑制剂。
3．本品抑制谱广，与各种细菌细胞裂解液兼容。

储存条件：低温运输，-20℃密封保存，有效期两年。使用时可短时间放置于常温或4℃中，用毕应立即放回-20℃中保存。

使用方法：临用前室温融解细菌专用蛋白酶抑制剂，混匀，按照1：100 比例加入到细菌细胞裂解液中。

注意事项：
1．本产品在水溶液中极不稳定，15分钟即可水解掉～50%的活性，需临用前加入。
2．本产品不含EDTA，为100×DMSO 储存液形式。使用时应调整本产品浓度为1×，若有蛋白酶含量丰富的细胞或组织，可适当增加本产品在实验体系中的浓度。
3．本产品置于-20℃保存时，DMSO 呈现冰晶状态，此属于正常现象，非产品质量问题。
4．避免反复冻融，可分装储存。

疑难解答：
1．该蛋白酶抑制剂有哪些优势？
答：针对多种*基酸的靶点，对目的蛋白进行全方位的保护，使其免受内源性蛋白酶的降解，蛋白的得出率较高，大大提高实验效率。
2．可以配合细胞裂解液一起使用吗？
答：可以，这样可以充分的裂解细胞或组织中的蛋白，有效降低蛋白质的降解。
3．为什么需要用DMSO溶解？可否换成其他溶剂？
答：本产品较易溶解于DMSO，且DMSO通常不会影响实验结果，而且性质稳定，利于保存和运输。因此暂不考虑其他溶剂。
4．实验时误将其放置常温下，会不会造成试剂变质？
答：短时间放置于常温下是可以的，不会造成试剂变质，因为蛋白酶抑制剂通常比较稳定。如果实验需要在常温下进行，建议将其置于冰块操作，用毕后迅速放置-20℃保存。同时应尽量避免反复冻融。

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