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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
389
- 英文名:
DNAgreen(UV)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货绿如蓝核酸染料(UV)厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:绿如蓝核酸染料(UV)
产地:国产|进口
编号:BTN70303
规格:1.5mL
目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花*类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料
产品特点:
1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时最好还是戴上塑料手套。
使用方法之一:电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在第一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
注:显色结果:在紫外下,DNA浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。
使用方法之二:电泳后染色DNA
本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN),将凝胶放入,室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
注意:电泳后染色液可以反复使用次数。
疑难解答:
Q:本产品可否用于RNA染色?
A:可以,不论RNA是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q:为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见?
A:跟EB一样,电泳时DNAGREEN 朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有DNAGREEN的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?
A:DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:
SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL胶中加3-5μl。最佳浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?
A: DNAGREEN染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
本产品在TAE中背景最强,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q:用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?
A:SYBR染料一般与DNA的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移,使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固,则无此现象。
Q:核酸染料是否都有毒性?
A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
一是染料的膜通透性,EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。
二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。
三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。
四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之,一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。
关键词:绿如蓝核酸染料,DNAgreen(UV),绿如蓝核酸染料(UV),BTN70303
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| BTN140587 | B-5固定液 |
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| BTN130618 | T7 DNA聚合酶(未修饰) |
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文献和实验的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。 Goldview从相似性对比试验结果来看
1、 请问哪些公司最新的气相色谱仪或者液相色谱仪的软件已经能够同时进行控制、数据处理、数据管理等功能了? 答:现在很多公司生产的液相、气相色谱仪软件已经采用控制、数据处理等都在WINDOWS版本下直接进行,这些和仪器配套的色谱仪软件一般都是只能控制厂家自己的一套色谱仪,而且价格都比较高(一般的报价几千美金);而现在很多工厂、科研院所、政府机关的实验室一般都拥有几台,甚至几十台色谱仪,这样的话如果每台仪器都要购买厂家的色谱软件,会是一笔不小的花费。现在国内有很多通用型的色谱工作站,都具有
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