北京现货植物叶绿体蛋白提取试剂盒促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货植物叶绿体蛋白提取试剂盒促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货植物叶绿体蛋白提取试剂盒促销
编号：BTN130887
品牌：百奥莱博
规格：15次
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和细菌蛋白质提取试剂盒而推出的新兴产品，专门用于植物叶绿体蛋白的快速提取。

产品特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片。
3. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、免疫印迹分析、蛋白活性测定和BCA法及Lowry法蛋白定量(不适用于Bradford法)。
4. 已经成功用于菠菜、大豆、莴笋、白菜、烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

 

成份	规格
匀浆液成分一	250mL×2
匀浆液成分二(干粉)	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
植物叶绿体纯化试剂盒	15次
溶液A	15mL
溶液B	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取还需要在昏暗的光线条件下进行。

一：叶绿体的纯化
1. 实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。
2. 新鲜(实验当天)制备匀浆液：将自备的去离子水与匀浆液成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入匀浆液成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1 g干粉)，摇晃溶解后所得溶液即为匀浆液，冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的匀浆液体积跟材料不同而不同。
3. 新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的匀浆液中(每克叶片加4mL匀浆液，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL匀浆液)。
4. 将浸泡了叶片的匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。
5. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中，再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
6.在水平转子离心机上4℃ 200 g离心3分钟(对菠菜，白菜和莴笋材料)或400 g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
7. 将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
8.在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色。
9.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：重悬时最好避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
10. 将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)，得到叶绿体粗提液，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白组分析。
11. 如果需要以之为材料精提叶绿体，就需要用密度梯度离心法将完整的叶绿体和其他污染物进一步分离。具体操作步骤是：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL Percoll，充分混合均匀。在其液面上小心铺上叶绿体粗提液。在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心8分钟，管底绿色沉淀为完整的叶绿体。小心将上清倒出后，用于叶绿体蛋白提取。

二：叶绿体蛋白质的提取
12. 将1mL的溶液A和100μL溶液B加入到叶绿体沉淀(约15mg湿重)中，吹打混匀。
13. 冰上放置30分钟至1小时至溶液变清。
14. 4℃ 1,2000 g离心1分钟。
15. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分样品到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

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BL1279 1×PBS,PH7.2-7.4,0.01M,细胞培养级
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·即用型LB平板培养基(含Amp)
编号：BTN130848B
英文名称：LB Petri Dish(Amp)
规格：10块
本产品为即用型LB平板培养基，A型为无抗生素LB平板，B型为LB-Amp平板，C型为LB-Kan平板，LB-Tet平板。

储存条件：低温运输及保存，有效期半年。

·茜素红S染色试剂盒
编号：BTN121105
英文名称：Alizarin Red S Staining Kit
规格：100mL
茜素红S染色试剂中的茜素红S可通过与*离子和其他金属离子发生鳌和反应而形成可以在显微镜下直接观察的带颜色的复合物。本产品就是基于此原理而开发。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要单独准备各种溶液。
2．操作简捷，性能稳定，显色清晰。
3．可用于组织切片中的*沉积，尤其适用于骨细胞或组织的病理和生理研究。
4．可用于检测动物原生代或培养细胞的*沉积。
5．本产品为通用型，不但用于*离子的检测，还可用于FeCl2和CdCl2的检测。

试剂盒组成：

成分	规格
茜素红S染色	100ml
茜素红S pH调节液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：试剂具有腐蚀性，操作时须带手套。实验时可以用含金属离子的切片或培养细胞作为阳性对照。可溶性蛋白会干扰茜素红S与*的相互作用，所以样品必须经过固定处理(以去除细胞中的可溶性蛋白)。对培养细胞，还必须洗涤去掉培养基(含血清等蛋白成分)。茜素红S与*的螯合反应需要在水相发生，因此加入茜素红S 前最好用水溶液洗涤掉前面操作所残留的有机溶剂。

一、茜素红S染色液的准备
1、根据所需检查的金属离子按下表选择茜素红S染色液的最佳pH。

金属离子	最佳PH	呈现的颜色
CaCl2，CaPO4、CaCO3	4.28-6.75	橙红
FeCl2	5.62-8.05	深紫
CdCl2	5.11-5.78	品红

2．用茜素红S pH调节液将茜素红S染色液调到所需的pH值。

二、染色载片上细胞
3．用缓冲中性福尔马林、福尔马林-乙醇混合液或乙醇作为固定剂固定铺在载玻片上的细胞(本试剂盒不提供上述固定剂)。
4．将细胞放入95%乙醇中处理。
5．将载玻片在空气中干燥。
6．将载玻片放在装有茜素红S染色液的染色缸中染色1-5分钟。注意：此步需要密切控制，最好每隔一分钟放在显微镜下检测，最佳时间随样品中盐离子的多少不同而不同。
7．用蒸馏水洗涤载片一次。
8．用丙*(代"酮")浸泡载波片30秒。
9．用丙*(代"酮")-二甲*混合液(50：50)浸泡浸泡载波片15秒。
10．肉眼可见红色或紫色(取决于所检查的离子)即可终止染色，放光学显微镜观察。*沉积阳性细胞将呈现桔红色。

三、染色石蜡包埋切片
11．按常规方法进行固定、包埋、切片、脱蜡和水化等操作，直到70%乙醇处理这步。注意：固定剂最好使用4%的副甲醛或10%福尔马林，切片厚度最好在0.4μm。
12．将切片浸入蒸馏水中。
13．将切片浸泡在茜素红S染色液中30秒-5分钟，具体时间以肉眼或显微镜下可见桔红色斑点为准。
14．用滤纸吸尽染色液后浸入丙*(代"酮")20次。
15．再进入丙*(代"酮")-二甲*混合液(50：50)20次。
16．最后用二甲*处理并用封固剂封片。

四：染色细胞培养(最好是26或6孔培养板培养的细胞，便于在显微镜下观察)
17．小心抽去培养液，注意不要吸走细胞。
18．沿壁上缓慢加入1-2mL自备的1×PBS或HBSS缓冲液，然后再小心将加入的液体吸出。
19．每孔中加入自备的无水乙醇直到全部覆盖细胞，室温放置30分钟后小心移弃无水乙醇，室温晾干。此步用于固定细胞。也可用10%甲醛代替无水乙醇，但固定时间只需要15分钟，同时还需要用蒸馏水洗涤3次才能进入下一步。每次洗涤时，先加入蒸馏水，再浸泡5-10分钟，然后小心吸走蒸馏水。注意：操作时不要破坏细胞单层。
20．每个细胞培养孔中加入1mL 茜素红S染色液，在室温下孵育至少20分钟，最后小心吸走茜素红S染色液。
21．加入1mL蒸馏水，然后小心吸走蒸馏水。此为洗涤步骤。注意：洗涤一定不要震荡以避免形成的*沉积物脱落。
22．重复上步操作3次(共洗涤4次)。
23.样品可立即用于显微镜检测。有*沉积的细胞将呈现桔红色。


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·动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)
编号：BTN111207A
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(A)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

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