北京现货土霉素盐酸盐溶液批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货土霉素盐*(代"酸")盐溶液批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货土霉素盐*(代"酸")盐溶液批发
编号：BTN120696
英文名：Oxytetracycline HCl Solution
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本产品为溶于水:乙醇(2:1)混合液浓度为100mg/mL的土霉素盐*(代"酸")盐溶液，参考浓度为50mg/mL。土霉素烟酸盐(盐*(代"酸")土霉素；氧四环素盐*(代"酸")盐；地霉素；Oxytetracycline hydrochloride)，分子式：C22H24N2O9·HCl，分子量是：496.89，CAS号：2058-46-0，土霉素盐*(代"酸")盐能阻止*基酰-tRNA与30S亚单位结合，从而抑制蛋白合成。抗菌谱：革兰氏阴性和阳性细菌。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

我公司的北京现货土霉素盐*(代"酸")盐溶液批发，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·非酶RNA清除剂2.0
编号：BTN60912
英文名称：Non-enzymatic RNA scavenger 2.0
规格：1.5mL
本品为非酶法质粒RNA去除试剂，专用于从DNA溶液中去除其中的RNA污染。

产品特点：
1.高效，能去除DNA溶液中70%以上的RNA污染。
2. 经过本产品处理过的样品在硅胶膜上的吸附率比没处理过的样品更高,与柱式硅胶膜离心吸附方法兼容。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
使用前如果本产品有分层，请冰浴后振荡混匀。

1.在一干净的离心管中加入含RNA污染的DNA溶液。
2. 加入0.1倍体积的预冷的本产品，充分混匀后冰浴10分钟。
3. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要1-5分钟)。
4.室温12000～15000×g离心2分钟(不能低温离心)，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。
5. 将上清(DNA溶液)转移到新的离心管中。
6. 如果需要，可以重复步骤3～6。
7. 所得DNA(上清)可以直接使用。

使用效果：

图注：用柱式质粒DNA提取试剂盒提取质粒DNA时，在上柱前用本产品处理裂解液(+)，其余操作不变。上样量为所得DNA量的1/5。显然没经过本产品处理的(-)质粒DNA含有大量的RNA污染。

疑难解答：
Q： 本产品与百奥莱博的RNA Scavenger-1有何区别？
A：1.本产品处理过的样品不再需要醇/盐沉淀处理，而RNA Scavenger-1处理的样品还需要醇/盐沉淀去除RNA Scavenger-1；2.本产品与柱式硅胶膜纯化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；3是本产品不但可以用于去除质粒DNA的RNA污染，还可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于质粒DNA样品。


北京现货土霉素盐*(代"酸")盐溶液批发关键词：土霉素盐*(代"酸")盐溶液,Oxytetracycline HCl Solution,2058-46-0


·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。


北京现货土霉素盐*(代"酸")盐溶液批发关键词：土霉素盐*(代"酸")盐溶液,Oxytetracycline HCl Solution,2058-46-0


·ATP依赖的DNase
编号：BTN120510
英文名称：ATP Dependent Dnase
规格：200U
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过*化铯/*乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效抑制了大肠杆菌基因组DNA的污染。

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