3´RACE试剂盒 基因结构和功能

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应3´RACE试剂盒 基因结构和功能，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：3´RACE试剂盒 基因结构和功能
编号：BTN101104
产地：国产|进口
英文名：3´-RACE Kit
品牌：百奥莱博
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是3´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其3´-端序列。本试剂盒就是根据3´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合物(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer(含dNTP)	50μl
PCR MagicMix 2.0(含酶和染料)	1.5ml
3´-RACE引物A(10μM)	10μl
3´-RACE引物B(10μM)	100μl
3´-RACE引物C(10μM)	100μl
RNase-Free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、利用含Oligo(dT)的3´-RACE引物A进行逆转录
 注意：MMLV酶使用前必须短暂离心，因为它含50%甘油，及其粘稠，否则将取不到所需体积。
1.在一个PCR管中，加入以下组分：

成分	用量
Poly(A)RNA(或总RNA)	0.2-2μg(5μg)
3´-RACE引物A(10μM)	1μL
MMLV Buffer(含dNTP溶液)	5μL
RNase-Free水	补至19μL
合计	19μL

 注意：如果可能，最好使用Poly(A)RNA作为模板。
  65℃保温5分钟，展开RNA的二级结构，立即冰浴待用。
2. 再在上述PCR管中加入1μl MMLV逆转录酶-RI混合物(200U/μL)。
3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟进行逆转录反应；然后50℃保温10分钟终止反应。
4. 加入0.5mL RNase-free水稀释上步得到的cDNA，冰浴待用。长期放置需要放-20℃保存。

二、利用基因专一性引物A和3´RACE引物B进行第一轮PCR
5. 用不同量的RT反应液(稀释后的cDNA)设置PCR(样品组最好设置用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
稀释后的cDNA	1	5	10	15
基因专一性引物A(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
3´RACE引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
98℃ 5分变性RNA-cDNA杂交链，短暂离心后再加入下列成分
PCR MagicMix 2.0	25	25	25	25
RNase-free水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

6. 按下列条件进行PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：52-60℃ 2分，72℃ 40分(此步的目地是合成第二链的cDNA，复性温度需要根据自备基因专一性引物A的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)。
 第2-30次循环：94℃ 1分钟，52-60℃ 1分，72℃ 3分(此步为PCR扩增，复性温度需要根据自备基因专一性引物A的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)。
 最后延伸：72℃ 15分
7. 取5μl的PCR反应液进行琼脂糖凝胶电泳以确认PCR扩增产物。若得到目的扩增产物需要用于后续实验，请于-20℃保存；若没有得到目的扩增产物，可按下列步骤进行巢式PCR反应。

三、利用基因专一性引物B和3´RACE引物C进行巢式PCR反应
8. 将上轮PCR产物(4管)均用水稀释稀释20倍，然后每管均用巢式PCR进行扩增。巢式PCR反应设置如下：

成分	用量
PCR MagicMix 2.0	25μl
上步得到的PCR反应液(稀释20倍后)	1μl
基因专一性引物B(10μm)	2.5μl
3´RACE引物C(10μm)	2.5μl
超纯水	补至50μL

9. PCR反应。按下列条件进行PCR：
第1-30次循环：94℃ 1分钟，52-60℃ 1分，72℃ 3分(复性温度需要根据自备基因专一性引物B的Tm值进行优化，一般可以从55℃开始)最后延伸：72℃ 15分
10.电泳检测。然后根据实验结果进行DNA测序或TA克隆。

注意事项：
1. 如果两轮PCR得到的非特异产物多，可以在RT反应是继续降低3´-RACE引物A的用量。
2.自备的基因专一性引物的GC含量最好跟3´-RACE引物B和引物C的一致，后者长度均为18nt，均含11个G(或C)，7个A(或T)。

欲了解更多3´RACE试剂盒 基因结构和功能的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:

·大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
编号：BTN140378
英文名称：E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
规格：10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，*霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。


3´RACE试剂盒 基因结构和功能关键词：3´RACE试剂盒,3´-RACE Kit,BTN101104

盐*(代"酸")万古霉素 Azophloxine 1404-93-9
ARB12772 小鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)elisa检测操作说明书 Mouse P-Selectin ELISA KIT
PY04-102  *化血红素  2.5mg/支×10支  每支添加于100ml 灭菌冷却至50℃的PYG培养基基础中  培养双歧杆菌用于有机酸代谢产物的测定
TTC染色液  1%|2% 50ml|100ml
CBZ-L-异亮*酸 DL-Homocysteine 3160-59-6
BTN60105 加A试剂盒 dA Tailing Kit
标准革兰氏染色液   4×10ml|4×100ml|4×250ml|4×500ml
A0301 优级新生牛血清(无菌采制) 100ml/200ml/500ml
ARB11787 人聚集蛋白(AgrIn)elisa检测 Human agrin ELISA KIT
ARB13539 兔子Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)Elisa方法检测 Rabbit collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
ARB13491 鸡核因子κB(NF-κB)Elisa分析 Chicken nuclear factor-kappa b,nf-κb ELISA KIT
ARB12443 大鼠骨粘连蛋白(ON)Elisa定量检测 Rat osteonectin,on ELISA KIT
Delafield苏木素染色液   100ml|500ml
BFD069 鸡禽流感抗体检测卡
ARB11337 人胎盘蛋白(PP)elisa检测 Human placental protein,pp ELISA KIT
3´RACE试剂盒 基因结构和功能关键词：3´RACE试剂盒,3´-RACE Kit,BTN101104


·DNA尿素-PAGE上样液
编号：BTN100874
英文名称：DNA Urea-PAGE Loading Buffer
规格：1.5mL
本品是2×的DNA尿素-PAGE变性电泳上样液，含有去离子甲酰胺、EDTA、染料等。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独配制各种溶液。
2. 使用简单，电泳的DNA样品与本上样液1：1混合，加热95℃处理5分钟，0℃冷却即可直接上样。
3.染料分子小，染色时不会干扰DNA条带的观察。
4.跟本公司的DNA尿素-PAGE变性电泳套装兼容。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

·即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子，无MCS)
编号：BTN120515
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type E
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 来源于pUC19 ，无RNA聚合酶启动子，插入位点两侧无多克隆位点。
4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
5. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
6.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体E型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱

北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购3´RACE试剂盒 基因结构和功能。