北京现货一站式miRNA柱式大提试剂盒优惠

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百奥莱博专业生产供应北京现货一站式miRNA柱式大提试剂盒优惠，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货一站式miRNA柱式大提试剂盒优惠
编号：BTN80906
英文名：One-stop miRNA column large-scale extraction kit
产地：国产|进口
规格：5次
品牌：百奥莱博
本试剂盒是在柱式miRNA提取试剂盒(BTN80104)基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

试剂盒特点：
1.样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。
2.一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟。
3. 得到的小RNA 长度大部分在200nt以下，包括 5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。无基因组DNA的污染。可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
离心吸附柱(大提)	10套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2 g左右的各种组织，可以在50mL塑料离心管中操作。
1. 新鲜配制裂解液20mL。将溶液A和溶液B按 1:1的比例混合(即溶液A和溶液B各10mL)，然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10 平方厘米细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每 1-5×106悬浮细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每克组织加10mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的50mL塑料离心管中，然后加入0.2-0.3倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需0.2-0.3mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约12-16mL)转移到一个离心吸附柱(大提)中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱(大提)之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附。
5. 12000～15000g室温离心离心吸附柱(大提)1分钟，收集管中的穿透液。大RNA 将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA 洗脱液。
6.在穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约30mL。
7. 分一次或分两次将混合液转移到新的离心吸附柱(大提)中，每次转移后需要12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。
 注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱(大提)。
8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心1分钟，弃穿透液。
9. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 12000～15000g室温离心1分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 miRNA的使用。
11. 将离心吸附柱(大提)转移到一自备的、50mL RNase-free 收集管中，加入0.5-1mL RNA 洗脱液。
12. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

附录：
1. 用 10mL自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA的离心吸附柱(大提)。
2. 重复上步一次。
3.干甩一次。
4. 加入0.5-1mL RNA 洗脱液，室温放置2-3分钟。
5. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

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PY01-134  溶菌酶(1:15000)  1克  
羟高铁血红素 Boc-L-glutamine 15489-90-4
58-96-8 Uridine 尿苷
85-61-0 辅酶A COA
DP107 高纯度质粒小提中量试剂盒
1-*酚 Sodium stannate 90-15-3
肝素*溶液(0.1%,12.5KU)   100ml
十三烷酸 MISIN 638-53-9
ARB11506 人脂蛋白脂酶(LPL)含量测试 Human lipoprotein lipase,lpl ELISA KIT
ARB10755 人抑肽酶(AP)ELISA代测服务 Human aprotinin,ap ELISA KIT
ARB14247 猪圆环病毒Ⅰ型抗原(PCVⅠ Ag)ELISA检测服务 
分子筛3A型 DL-Alanine 308080-99-1
4-甲**胺树脂 α-Napthyl acetate
叶绿素B Glycine 519-62-0
PY04-053  印度墨汁  50ml/瓶  见使用说明书  炭疽杆菌检测用配套试剂
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·KOD DNA聚合酶
编号：BTN101002
英文名称：KOD DNA Polymerase
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

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·先锋霉素溶液
编号：BTN120685
英文名称：Cephalotin Solution
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的先锋霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。先锋霉素(7-(2-Thienylacetamido)cephalosporanic acid sodiu*(代"m") salt；Cephalotin sodiu*(代"m") salt)，分子式：C16H15N2NaO6S2，分子量为：418.42，CAS号：58-71-9，溶于水。头孢菌素类抗生素因有共同的母核——7-*基头孢烷酸而得名，不同种类的头孢菌素所带侧链不同，而侧链是人工接上的，所以头孢菌素是一种半合成抗生素。之所以又叫“先锋”，那是从“头孢”的原文Ceph=.cefo译音而来。

储存条件：常温运输、4℃避光保存、有效期一年。

·硫*(代"酸")新霉素干粉
编号：BTN60203
英文名称：Neomycin Sulfate Powder
规格：1g
本品为白色或类白色的粉末，极易引湿，水溶液显右旋光性。在水中极易溶解，在乙醇、乙*(代"醚")、丙*(代"酮")或*仿中几乎不溶，有毒。

作用原理：通过结合于70S核糖体亚基阻碍蛋白质合成。高浓度的新霉素可导致真菌细胞毒作用，这是由于它和真核线粒体核糖体(与原核核糖体相似)相互作用，与真核核糖体低亲和力。

抗性机制：抗性基因aph 来于Tn5，编码*基糖苷磷酸转移酶元，它使硫*(代"酸")新霉素失活。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

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