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- 百奥莱博
- WE0202-ZFN
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
963
- 英文名：
RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
- 保质期：
1个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
2～8℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)(国产,进口)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。
名称：新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)(国产,进口)
英文名：RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
编号：WE0202
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：50次
本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA，即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA，如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣，香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方，可使细胞中的RNA酶迅速灭活，有效去除多糖多酚对RNA提取的影响，无需*酚、*仿等试剂，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，提取的总RNA纯度高，无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| Buffer RLS | 40ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FS及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。
自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)
产品特点：
1、适用范围广：可从各种植物中提取总RNA，即便是多糖多酚含量丰富的植物也能成功提取。
2、纯度高：彻底去除污染物及下游反应抑制物，提取的RNA适合于多种下游应用。
3、成功提取的样本：水稻叶片、小麦叶片、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黄豆、花生、马铃薯块茎、松针、银杏叶、杨树叶、冬青叶、月季等样本。
RNA得率：
| 植物样本(100mg) | 总RNA量(μg) |
| 拟南芥荚果 | ～50 |
| 大豆 | ～55 |
| 玉米叶片 | ～55 |
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头。
② 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、Buffer RLS如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
4、Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RLS加20μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
5、第一次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
操作步骤：
1、匀浆处理：取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入500μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇)，立即涡旋剧烈震荡混匀。
注意：对于含水量极其丰富的材料，如西瓜果肉，西红柿，梨果肉等，可以适当多加入些材料，最多可增加至200mg；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，可适当增加Buffer RLS的用量，最多可增加至700μl。
2、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟。
3、将上清液转入已装入收集管的过滤柱中，4℃ 12000rpm离心1分钟，小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中，枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4、缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入。4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4℃ 12000rpm离心1 分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、4℃ 12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free Water，室温放置2分钟，4℃ 12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。
储存条件：2～8℃。
我公司的新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)(国产,进口)，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
·6×UltraStain上样缓冲液
编号：WE0211
英文名称：6×UltraStain Loading Buffer
规格：500μl|500μl×5
本产品在常规6×Loading Buffer中添加了UltraStain染料，该染料是一种生物大分子，不能穿透细胞膜进入细胞内。相对于EB的强诱变性，是一种安全无毒的核酸染料。使用6×UltraStain Loading Buffer替代原始Loading Buffer时，在制胶过程中无需加入EB等核酸染料，只需要将DNA与6×UltraStain Loading Buffer混匀即可进行凝胶电泳。由于UltraStain与EB具有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置，在正常紫外光激发检测即可，使用非常方便和灵活。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、由于该染料只需在电泳前与DNA混匀，无需加入凝胶中，可使制备的凝胶保存时间更长。
2、由于Loading Buffer中染料的量远高于将染料加入凝胶中的量，对DNA的灵敏度更高。
操作步骤：
1、配置合适浓度的琼脂糖凝胶
2、吸取5μl DNA样品与1μl 6×UltraStain Loading Buffer混匀后，直接电泳于上样孔内，进行常规电泳和图像采集。
图为向Super DNA Ladder(货号：WE0243)中添加1μl 本产品，在不加染料的TAE缓冲液配置的琼脂糖凝胶中的电泳图
储存条件：2～8℃避光
新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)(国产,进口)关键词：新型植物RNA提取试剂盒,新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I),RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I),WE0202
·FITC标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0385
英文名称：Rabbit Anti-Goat IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。
免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：Immunofluorescence(1：25-100)
·高效cDNA第一链合成试剂盒
编号：WE0131
英文名称：MMLV cDNA Synthesis Kit
规格：100次
本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解，更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强，可得高产量的cDNA，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。
试剂盒组成：
| 组份 | 100次 |
| MMLV，200 U/μl | 100μl |
| 5×RT Buffer | 500μl |
| Primer Mix | 240μl |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 500μl |
| DTT，0.1 M | 240μl |
| RNase-Free Water | 1ml |
产品特点
1、RNase H-：经突变的MMLV逆转录酶，RNase H活性缺失，更易获得全长cDNA。
2、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。
注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
操作步骤：
注意：10ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。
I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 1ng-5μg |
| 5×RT Buffer | 4μl | 1× |
| DTT，0.1 M | 2μl | 10 mM |
| MMLV，200 U/μl | 1μl | |
| RNase-Free Water | up to 20μl |
注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。
3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。
II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 1ng-5μg |
| RNase-Free Water | up to 13μl |
3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| 5×RT Buffer | 4μl | 1× |
| DTT，0.1 M | 2μl | 10 mM |
| MMLV(200U/μl) | 1μl |
注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。
6、轻轻吹打混匀，42℃孵育50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)(国产,进口)关键词：新型植物RNA提取试剂盒,新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I),RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I),WE0202
·0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH6.8)
编号：WE0285
英文名称：0.5 M Tris-HCl(pH6.8)
规格：500ml
·抗c-Myc标签单克隆抗体
编号：WE0332
英文名称：Anti c-Myc Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的c-Myc-Tag融合蛋白。
抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成第410-419位多肽序列(EQKLISEEDL)
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(1：200-20000)
·快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)
编号：WE0142
英文名称：BaFaSYBR Mixture(Low ROX)
规格：5ml
本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。
产品组成：
| 组份 | WE0141-5ml | WE0142-5ml | WE0143-5ml |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
| 50×Low ROX | - | 200μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 200μl |
| ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系：
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 20 s | |
| 变性 | 95℃ | 3 s | 35-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 s | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
| 60℃ | 1 min | ||
| 95℃ | 15 s | ||
| 60℃ | 15 s |
注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
储存条件：-20℃，避免反复冻融
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文献和实验相关实验
粉末状后再按每管100 mg的量分装到1.5 ml离心管中，每管再加入600 µl含β-巯基乙醇的植物总RNA提取液）。 加入600 µl Buffer EX，用力混合均匀，13000 rpm离心10分钟。 小心吸取350 µl上清，转入一个洁净的1.5 ml离心管中。 在上清液中加入等体积的RNA沉淀液，盖上管盖混合均匀，13000 rpm离心5分钟。 弃上清，低速离心数秒使管壁上的上清液聚集到管底，用200 µl吸头吸尽残留的上清液。 加入1 ml 70%乙醇，盖上管盖，旋涡震荡悬浮
一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。 下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因： 市面上最常见的RNA提取试剂盒
活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。♦ 产品特点：1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2. 不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需
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