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- NobleRyder
- P4813
- 北京
- 2025年12月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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99
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12个月
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
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已收到实际货物为准
产品简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液（强） (Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。所获得的蛋白质可以用于 Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等。Enhanced RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
产品组成：
| 编号 名称 |
P4813 | Storage |
| Enhanced RIPA Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
| PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
| 使用说明书 | 1份 | |
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、 去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。5、 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。5、 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
3按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃
裂解 15-30min。
4、步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
5、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。6、 进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以丌用清洗。
2、 如果裂解丌充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减
少裂解液的用量。
3、 如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难
裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。
5、 溶解 NobleRyder RIPA Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。
6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在丌检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-KB、p53 等时，通常丌必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
7、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
RIPA裂解液(强)
有效期： 12个月有效。
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文献和实验。大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取（如 RIPA 裂解液），但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分，即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中[1,2] 。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白，而仅仅是一些可溶性蛋白。那使用 RIPA 等溶液法提取的不完整总蛋白做实验，到底会不会影响我们磷酸化蛋白检测和定量研究呢？我们来一起讨论下。Brady 等人中
、转移液体来实现核酸的提取，一般通过操作系统控制机械臂来实现转移。提取过程如下: 1) 裂解：在样品中加入裂解液，通过机械运动及加热实现反应液的混匀及充分反应，细胞裂解，释放核酸。 2) 吸附：在样品裂解液中加入磁珠，充分混匀，利用磁珠在高盐低PH值下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸，在外加磁场作用下，磁珠与溶液分离，利用吸头将液体移出弃至废液槽，吸头弃掉。 3) 洗涤：撤去外加磁场，换用新吸头加入洗涤缓冲液，充分混匀，去除杂质，在外加磁场作用下，将液体移出。 4) 洗脱：撤去外加磁场
8.0），2.5 mmol/L EDTA处理，冰浴放置10min。 《精编分子生物学实验指南》 四、裂解液处理法： 1、细胞裂解液：50 mmol/L Tris-Cl pH 6.8，100 mmol/L DTT，2% SDS，0.1%溴酚蓝，10%甘油。SDS是阴离子型表面活性剂、极易促溶、强变性作用。 2、在loading buffer加SDS，100度5分钟，是变性方法。SDS与蛋白等量结合，可以通过条带位移判断蛋白大小，考染不会影响结果。 3、如果是做小量菌液，跑PAGE胶
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