- 询价
- NobleRyder
- P4833
- 北京
- 2025年12月13日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件：
已收到实际货物为准
产品简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。所获得的蛋白质可以用于Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等。
Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由Tris、NP-40、sodium deoxycholate等组成，不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。
产品组成：
| 编号 名称 |
P4833 | Storage | |
| Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors | 100ml | -20℃ | |
| 使用说明书 | 1份 | ||
RIPA裂解液(强,无抑制剂)
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例， 加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。
4、10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl裂解液的比例，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
3、按照每20mg组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15-30min。
4、步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
5、10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
6、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。
5、溶解RIPA Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。
6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-KB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
7、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
RIPA裂解液(强,无抑制剂)
有效期：12个月有效。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验。大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取（如 RIPA 裂解液），但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分，即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中[1,2] 。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白，而仅仅是一些可溶性蛋白。那使用 RIPA 等溶液法提取的不完整总蛋白做实验，到底会不会影响我们磷酸化蛋白检测和定量研究呢？我们来一起讨论下。Brady 等人中
，比如 RIPA，虽然裂解剧烈，但是无法维持蛋白天然构象，会破坏互作蛋白对。 如果自配，建议采用温和系统，比如 NP40/Triton 0.1%-1%；SDS ≤0.1%，盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合，要考虑孵育（结合）顺序 如果抗体和 beads 先孵育，建议 选择 pH 8.2（更常用）或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y，抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X
(pH8.5~9.0)，2mMEDTA，100mMNaCl，0.5%TritonX-100，1mg/ml溶菌酶。 10、我们用NP40（NP40：NONIDET p-40 乙基苯基聚乙二醇，是一种非离子表面活性剂。）加DTT和蛋白酶抑制剂裂解细胞，冰上放30－60min，然后13000rpm离心15min，取上清定量。 11、裂解液配方是：50mmol/L Tirs-HCI (PH 8.0)，150mmol/L NaCI，0. 02% 叠氮钠，100μg/ml PMSF，1μg
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
