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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
782
- 英文名:
Instant PCR MasterMix
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")即用型PCR试剂盒(含染料)促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:即用型PCR试剂盒(含染料)促销
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
规格:1ml×10|5mL×20
英文名:Instant PCR MasterMix
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应,具有广泛的用途。
产品特点:
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷,操作步骤已经最大限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆,不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供,方便客户组合。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中,加入下列成分:
| 试剂 | 加入量 | |
| PCR MagicMix | 15μl | |
| DNA模板(自备) | 哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因组DNA | 5-500ng | |
| 细菌基因组DNA | 0.5-50ng | |
| 质粒DNA | 5-500pg | |
| PCR回收片段 | 1-100pg | |
| PCR引物(自备) | 10pmol each | |
| 补水到 | 30μL | |
放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳,按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意:
1.如果反应体系不是30μL,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804,30μL体系中加3uL),可能会对PCR有帮助。
PCR反应的影响因素
变性温度与时间:模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链DNA模板,PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全,DNA双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热DNA聚合酶的活力,最高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间:退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,DNA扩增效率下降;温度低产量高,但过低可造成引物与模板错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,退火时间一般为30~60秒,足以使引物与模板之间完全结合,长时间退火没有必要。
延伸温度与时间:PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定,如同样扩增2 Kb片段,若使用Taq酶只需1分钟,使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现,时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数:可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素,设定20-40个循环。循环次数太少,扩增量不足,如果循环次数太多,错配几率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
酶量:50μl反应体系可用0.5-5 U酶,酶量的选择与模板DNA的量,扩增片段大小等有关,酶量过多易发生非特异性反应,而且可能增加突变的机率,尤其在进行高保真扩增时,应尽量减少酶量,但酶量过少时反应性能下降。
模板:模板可以是单链DNA,也可以是双链DNA,质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多,不超过1μg为宜,因为加量过多可能导致非特异性扩增增加,但是要考虑模板中靶序列的含量。例如,使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列,就需要适当加大模板用量。
引物:引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸,最高不宜超过30个核苷酸,最佳长度为20~24个核苷酸,如需插入酶切位点,应在酶切位点5´端多加几个碱基,有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构,如发夹结构。两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3´端。如果可能,引物3´端最好富有GC,这样退火后有利于引物3´端的延伸。人工合成的引物最好经过色谱层析纯化或PAGE纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右,浓度太高会导致非特异性扩增,太低则扩增产物太少。
除即用型PCR试剂盒(含染料)促销外,我公司正在打折促销以下产品:
·大肠杆菌DNA连接酶
编号:BTN120419
英文名称:E.coli DNA Ligase
规格:1000U
本酶催化相邻DNA链的5´-P末端和3´-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需NAD作辅酶。本酶只能催化突出末端DNA之间的连接,但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下,也能连接平滑末端的DNA,但不能催化DNA的5´-P末端与RNA的3´-OH末端以及RNA之间的连接。其工作原理图如下:
产品用途:
1.DNA片段和载体DNA的连接。
2.DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
3.cDNA的第二条链的合成。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:在20μl的连接反应体系中,6μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯度:
1.360U的本酶和1μg的λ-Hind III片段在37℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2.360U的本酶和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发变化。
3.360U的本酶和1μg的16S,23S rRNA在37℃下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
备注:BSA在-20℃下易产生沉淀,应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。
即用型PCR试剂盒(含染料)促销关键词:即用型PCR试剂盒,即用型PCR试剂盒(含染料),BTN90805,Instant PCR MasterMix
豆固醇 Protein protectant DSP50 83-48-7
ARB14048 猴子巨噬细胞移动抑制因子(MIF)Elisa分析 Monkey macrophage migRation inhibitory factor,mif ELISA KIT
ARB13024 小鼠肝细胞生长因子(HGF)含量分析 Mouse hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
SJ0697 超低分子量蛋白Marker Ⅱ (3.5-26.6kD)
BTN60201 非酶DNA清除剂 DNA Erasol
BL0936 生物素化羊抗人IgG抗体
ARB12548 大鼠胰脂肪酸ELISA代测服务
BL0635 SP-琼脂糖凝胶FF SP Sepharose FF
25988-63-0 Poly-L-Lysine 多聚-L-赖*酸(3-7万)
PY02-215 破伤风梭菌培养基基础 250克
阿利新蓝染色液(pH2.5) 3×50ml|3×100ml
ARB11004 人补体3裂解产物(C3SP)尿液中含量检测 Human complement 3 split product,c3sp ELISA KIT
ARB12089 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)代做ELISA实验 Rat aquaporin 5,aqp-5 ELISA KIT
*化铷 11-Aminoundecanoic acid 7791-20-0
ARB10126 人N-乙酰-β-D-*基葡萄糖苷酶(NAG)Elisa方法检测 Human n-acetyl-β-d-glucosaminidase,nag ELISA KIT
HC0298 八道可调半支灭菌移液器
SJ0005 熊果酸(标准品) UDCS
ARB12504 大鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)elisa检测 Rat chorionic gonadotrophin β,β-cg ELISA KIT
曲*胸苷 N-P-K 70-00-8
PY01-061 马尿酸 25克
超纯水(无菌) 100ml|500ml
87-79-6 L-山梨糖 L-Sorbose
即用型PCR试剂盒(含染料)促销关键词:即用型PCR试剂盒,即用型PCR试剂盒(含染料),BTN90805,Instant PCR MasterMix
·石蜡包埋组织直接RT-PCR试剂盒(免RNA提取)
编号:BTN131176
英文名称:FFPE direct RT-PCR Kit (RNA extraction-free)
规格:30次
·DNA marker(200-1500bp)
编号:BTN70503C
英文名称:DNA ladder(200-1500bp)
规格:50次
本系列产品用作凝胶电泳中双链线状DNA的分子量大小参照。它们是由一系列大小不同的单一DNA片段混合组成。成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5μL。
使用效果:
注:800bp条带为20ng/uL,其余每条带为10ng/uL
疑难解答:
a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
c)本产品条带均匀,亮度相当,但在EB胶中长时间电泳有可能会出现250bp以下的条带变淡。可以通过先电泳再染色,加大EB浓度等方法解决。
·液相RNase清除剂
编号:BTN3091
英文名称:Solution RNase Scavenger
规格:1.5mL
本品含有特殊化合物,能使溶液中可能污染的微量的RNase失活,适合于溶解RNA沉淀。同时它还能用于处理用DEPC 不能处理的含*基的溶液,如Tris、MOPS等。
产品特点:
1. 灭活溶液中RNase,60℃20分钟处理可灭1μg/mL的RNase,37℃ 20分钟处理可灭50 ng/mL RNase。
2. 不影响绝大多数后续反应,包括逆转录、RNA 合成和RT-PCR等反应3. 对RNase A,RNase 1和RNase T1 有效。
4.适合于各种缓冲液,包括不能用DEPC处理的Tris 及MOPS等缓冲液。
5. 使用简单,60℃处理10-20分钟既可,处理过的溶液随还可以再处理。处理后溶液不需高压灭菌(不同于DEPC处理)。
6. 本产品含A和B 两种成份,可以在-20℃保存一年,配成溶液后可以在-20℃保存六个月。
储存条件:4℃运输,-20℃保存,有效期为1年。
使用方法:
1. 将120mg 成份A 全部加入到1.5mL 成份B中,摇晃致全部溶解,得到20X的液相RNase 清除剂,分装成小包装放-20℃长期保存。20X液相RNase 清除剂溶液的有效期为六个月。
2. 使用时在待处理的溶液或反应液中加入1/20 体积的液相RNase 清除剂(如:100μL溶液中可加5μL液相RNase 清除剂)。
3. 如果用于溶解提取或纯化的RNA样品,需要先用超纯水将液相RNase 清除剂稀释20倍,然后直接用于溶解RNA(注意:稀释后的液相RNase 清除剂不能长期保存,只能现配现用)。
4. 60℃处理20分钟以使污染的RNase 失活。
5. 冷却至室温即可使用,或置于-20℃长期保存。
6. 对60℃处理敏感的酶(如RNA 多聚酶)应在60℃处冷却后再加入。
7.处理过的溶液随时可以再处理(60℃ 10-20分钟),以去除任何可能发生的RNase污染。
8. 如果溶液中有不能用60℃处理的样品,也可以用37℃处理20分钟,但最多只能灭活50 ng/mL的RNase 。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购即用型PCR试剂盒(含染料)促销。
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