- ¥1100
- XY-Bioscience
- XY06003V
- 中国/上海
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
GST标签融合表达T载体pBET3
- 保质期：
见说明书
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
保存温度：4-8 ℃ 保存于20%乙醇溶液中
- 规格：
20μl
pBET-3载体是高效表达T载体，线性化载体3’-末端含有突出的碱基“T”，可以将3’-末端含有“A”的PCR扩增产物高效率的连接至pBET-3载体上。同时该载体含有完整的表达元件，如T7启动子、RBS、转录终止子等。此外，在表达框内N-末端含有GST标签序列，C-末端含有His6标签，双标签都可以与外源基因融合表达，得到N-末端融合有GST标签和C-末端有His6标签的蛋白，该融合蛋白可以用GST亲和层析纯化，也可以用His6标签进行亲和纯化。
GST标签融合表达T载体pBET3产品特色
一步法完成基因克隆与表达载体的构建，所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。
组分
pBET-3（70 ng/µl） 20 μl 1支
T7t primer（10 pmol/µl） 150 μl 1支
GST标签融合表达T载体pBET3保存条件
保存温度：-20 ℃
使用方法
1. 按照连接酶的说明书设置连接反应体系，进行连接反应。
2. 将连接反应产物加入100 μl感受态细胞中，冰水浴放置30分钟。
3. 迅速置于42 ℃水浴热激2分钟，迅速在冰水浴放置2分钟。
4. 加入900 μl 2YT（或LB）培养基，37 ℃，180 rpm振荡培养45分钟。高速离心收集菌体，去掉800 μl上清，留200 μl重悬细胞。
5. 将200 μl细胞重悬液涂布在含有相应抗生素的琼脂平板培养基上，37 ℃倒置培养过夜，形成单克隆。
6. 挑取单菌落，鉴定阳性克隆。
GST标签融合表达T载体pBET3注意事项
1. 连接反应请在16 ℃以下进行，温度升高较难形成环状DNA。连接时间控制在4℃反应过夜或者16 ℃反应2小时至4小时。对于较难连接的反应，可以4 ℃过夜和16 ℃连接2小时交替连接。反应时间过短或者温度高较难筛选得到阳性克隆。
2. 为提高克隆鉴定的效率，尽量减少假阳性，保证鉴定克隆为正向插入克隆，在用PCR方法进行阳性克隆鉴定时，应采用载体上游引物和扩增片段的下游引物进行鉴定或者采用载体下游引物和扩增片段的上游引物进行鉴定。
产品目录
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 报价(元) |
| XY06003AS | GST标签融合表达T载体试剂盒 | 5μl | 400 |
| XY06003A | GST标签融合表达T载体试剂盒 | 20μl | 1200 |
| XY06003V | GST标签融合表达T载体pBET3 | 20μl | 1100 |
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文献和实验，只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明；Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白，并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系，分离出互作的蛋白复合物，是细胞内的体内反应结合。2. GST pull-down 实验优点① 可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。② GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。3. GST pull-down 实验缺点① 验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。② 融合表达的 GST 标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。
) ，Neo(G418)，Zeo，Hygro，其中Puro和BSR是较常用的真核抗性。真核抗性常用于稳定株筛选等过程，具体使用抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认，浓度梯度可根据抗生素说明书推荐浓度范围设置。(4)蛋白标签：蛋白标签（protein tag）：与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见标签：3xFLAG，6xHis，HA，Myc ，OLLAS，GST等。需注意目的蛋白是否有功能肽如信号肽，前肽等，蛋白标签需要融合无功能肽的一端
老话说的好，巧妇难为无米之炊，要做好标签蛋白质的纯化实验，首先得选择合适的填料和预装柱，以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族，一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧！ 蛋白标签（Protein Tag） 所谓蛋白标签（Protein Tag）是指利用 DNA 体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag 和组合式的双标签。Cytiva 可为
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