GST标签融合表达T载体pBET3

GST标签融合表达T载体pBET3

pBET-3载体是高效表达T载体，线性化载体3’-末端含有突出的碱基“T”，可以将3’-末端含有“A”的PCR扩增产物高效率的连接至pBET-3载体上。同时该载体含有完整的表达元件，如T7启动子、RBS、转录终止子等。此外，在表达框内N-末端含有GST标签序列，C-末端含有His6标签，双标签都可以与外源基因融合表达，得到N-末端融合有GST标签和C-末端有His6标签的蛋白，该融合蛋白可以用GST亲和层析纯化，也可以用His6标签进行亲和纯化。

GST标签融合表达T载体pBET3产品特色
一步法完成基因克隆与表达载体的构建，所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。

组分
pBET-3（70 ng/µl）                20 μl      1支
T7t primer（10 pmol/µl）    150 μl      1支

GST标签融合表达T载体pBET3保存条件
保存温度：-20 ℃

使用方法
1. 按照连接酶的 说 明 书 设置连接反应体系，进行连接反应。                                        
2. 将连接反应产物加入100 μl感受态细胞中，冰水浴放置30分钟。                        
3. 迅速置于42 ℃水浴热激2分钟，迅速在冰水浴放置2分钟。
4. 加入900 μl 2YT（或LB）培养基，37 ℃，180 rpm振荡培养45分钟。高速离心收集菌体，去掉800 μl上清，留200 μl重悬细胞。
5. 将200 μl细胞重悬液涂布在含有相应抗生素的琼脂平板培养基上，37 ℃倒置培养过夜，形成单克隆。
6. 挑取单菌落，鉴定阳性克隆。

GST标签融合表达T载体pBET3注意事项
1. 连接反应请在16 ℃以下进行，温度升高较难形成环状DNA。连接时间控制在4℃反应过夜或者16 ℃反应2小时至4小时。对于较难连接的反应，可以4 ℃过夜和16 ℃连接2小时交替连接。反应时间过短或者温度高较难筛选得到阳性克隆。
2. 为提高克隆鉴定的效率，尽量减少假阳性，保证鉴定克隆为正向插入克隆，在用PCR方法进行阳性克隆鉴定时，应采用载体上游引物和扩增片段的下游引物进行鉴定或者采用载体下游引物和扩增片段的上游引物进行鉴定。

产品目录

货号	产品名称	规格	报价(元)
ZK06003AS	GST标签融合表达T载体试剂盒	5μl	400
ZK06003A	GST标签融合表达T载体试剂盒	20μl	1200
ZK06003V	GST标签融合表达T载体pBET3	20μl	1100