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长期
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878
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
SYA283型玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒品牌的品牌:百奥莱博,是优质的转基因PCR检测试剂盒产品,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒等转基因PCR检测试剂盒产品请联系我司咨询订购。
名称:SYA283型玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒品牌
产地:国产|进口
编号:SYA283
等级:科研试剂
品牌:百奥莱博
规格:48次/盒
欲咨询购买SYA283型玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒品牌,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·勃氏考克氏体单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA134
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·副伤寒沙门杆菌单重荧光PCR检测试剂盒(有甲乙丙三型)
编号:SYA060
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA157
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·麻疹病毒/风疹病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA250
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·玉米特异性基因Invertase单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA275
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·非洲猪瘟病毒(ASFV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA421
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对非洲猪瘟病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对非洲猪瘟的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。
二、用途:
本试剂盒适用于动物病料、鼻咽拭子、血液等样本中非洲猪瘟病毒的特异检测。适用于非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。最低检测限:500copies/mL,稳定性:批内及批间差异系数≤3% 。
三、试剂盒组成:(48T)
小盒(扩增试剂盒)
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 非洲猪瘟病毒荧光qPCR反应液(ASFV-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 阳性对照(ASFV-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
大盒(提取试剂盒)
| 组份 | 规格 | 数量 |
| FD1试剂 | 15mL/瓶 | 1瓶 |
| FD2试剂 | 500μL/管 | 1管 |
| FD3试剂 | 15mL/瓶 | 1瓶 |
| FD4试剂 | 30mL/瓶 | 1瓶 |
| FD5试剂 | 2mL/管 | 2管 |
| 吸附柱及收集管 | 48套/包 | 1包 |
四、储存条件及有效期
小盒于-20℃以下保存,有效期为6个月;大盒室温避光保存,有效期12个月。
五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 DNA提取
请查看配套提取试剂盒说明书
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(ASFV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| ASFV反应液 | 14µL | N×14µL |
| 酶混合液 | 1µL | N×1µL |
| 总量 | 15µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(ASFV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(ASFV-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(2)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明ASFV核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明ASFV核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行ASFV qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明ASFV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
SYA283型玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒品牌关键词:百奥莱博,SYA283,玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒
·西部马脑炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA235
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·手足口病肠道病毒(EV71)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA211
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA177
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒说明书
一、简介:
人副流感病毒(Parainfluenza viruses,PIVs),是一种常常引起儿童下呼吸道感染的单链的RNA病毒,属于副黏病毒。本试剂盒用一对人副流感病毒4 型特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒4 型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探针报告基团为FAM。
二、用途:
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子等临床样品中人副流感病毒4 型的特异性检测。适用于人副流感病毒4 型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
人副流感病毒4型反应液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感病毒4 型阳性对照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月,反复冻融次数不宜超过5次。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Stratagene MX系列,Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照PIV4-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。其中FAM基团检测PIV4,淬灭基团为None。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
(2) 阳性对照(PIV4-PTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
8.3 结果判定
FAM通道:Ct值≤35,人副流感病毒PIV4亚型核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
SYA283型玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒品牌关键词:百奥莱博,SYA283,玉米转基因T25单重凝胶PCR检测试剂盒
4-**氧乙酸 Acid Orange 12 122-88-3
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ARB10473 人白介素12(IL-12/P40)尿液中含量检测 Human interleukin 12,IL-12/p40 ELISA KIT
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偏钒酸* BUCHE 16519-65-6
3-[(3-胆固醇*丙基)二甲基*基]-1-丙磺酸 Phenolphthalexone 75621-03-3
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文献和实验) 微量移液器和配备的吸头 ( 21 ) 移液管(10 ml 和 20 ml) ( 22 ) 冰 ( 23 ) 液氮 2. 试剂 ( 1 ) 植物基因组提取试剂盒( Amersham Biosciences) ( 2 ) 植物基因组小量提取试剂盒( Qiagen,#69104) ( 3 ) 凝胶回收试剂盒( Qiagen,#28101) ( 4 ) PCR 回收试剂盒(Qiagen,#28104) ( 5 ) 限制性内切核酸酶和相应的反应缓冲
、cDNA合成、PCR分析 胚胎收集在含100µl Trizol无RNA酶的微管中,然后转移入0.5ml EP管中用20µl氯仿5000g转速离心两次。总RNA在1.5µl GlycoBlue与等体积的异丙醇中沉淀。残存的DNA用无DNA试剂提取。RNA再次沉淀,用70%乙醇清洗,最后用2µl无RNA酶水溶解。首先用SMART PCR cDNA合成试剂盒合成与扩增cDNA。然后用QIAquick PCR提纯试剂盒提纯cDNAs,用100µl水洗脱cDNAs。用2%琼脂糖凝胶溶解PCR
注射浓度超过一定上限时,实验效果不佳,而且大于5 ng/ml会产生明显的毒性作用。导入DNA的制备程序如下:1) 通过在Tris/acetate/EDTA缓冲液中进行琼脂糖凝胶电泳从载体中分离待插入DNA,用5mg/ml溴乙啶染色。2) 为防止对插入DNA的溴乙啶的破坏,用长波紫外光显影。3) 切下目的基因所在凝胶片,电泳制备目的DNA,或用Qiaex凝胶抽提试剂盒进行抽提。4) 乙醇沉淀目的DNA。在样品中加入1/10体积的3M乙酸钠,混匀,再加入2-2.5倍体积无菌100%乙醇进行沉淀
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