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北京百奥莱博科技有限公司
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北京现货季节性H1流感病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多季节性H1流感病毒荧光PCR检测试剂盒等病毒PCR检测试剂盒产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货季节性H1流感病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖
产地:国产|进口
编号:SYA148
品牌:百奥莱博
等级:科研试剂
规格:48次/盒
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北京现货季节性H1流感病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖关键词:季节性H1流感病毒荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA148
·蜱传出血热病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA239
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪圆环病毒II型抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA638
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
·小双节RNA病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA208
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·SARS病毒(SARS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA461
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·嗜水气单胞菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA077
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·类致贺邻单胞菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA078
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA177
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒说明书
一、简介:
人副流感病毒(Parainfluenza viruses,PIVs),是一种常常引起儿童下呼吸道感染的单链的RNA病毒,属于副黏病毒。本试剂盒用一对人副流感病毒4 型特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒4 型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探针报告基团为FAM。
二、用途:
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子等临床样品中人副流感病毒4 型的特异性检测。适用于人副流感病毒4 型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
人副流感病毒4型反应液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感病毒4 型阳性对照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月,反复冻融次数不宜超过5次。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Stratagene MX系列,Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照PIV4-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。其中FAM基团检测PIV4,淬灭基团为None。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
(2) 阳性对照(PIV4-PTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
8.3 结果判定
FAM通道:Ct值≤35,人副流感病毒PIV4亚型核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·手足口病科萨奇A16病毒(CoxA16)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA212
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·牛支原体抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA664
英文名称:Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit
等级:科研实验专用
规格:96次/盒
【主要成分】
组份 数量 规格
包被板 1 块 96T
阴性血清对照 1 管 1ml/管
阳性血清对照 1 管 1ml/管
样品稀释液 1 瓶 50ml/瓶
10×洗液 1 瓶 30ml/瓶
兔抗牛IgG酶标抗体 1 瓶 12ml/瓶
底物显色液 1 瓶 12ml/瓶
终止液 1 瓶 6ml/瓶
说明书 1 份
【作用与用途】
适用于牛血清中牛支原体抗体的检测。
【用法与判定】
1、试剂准备
仔细阅读说明书,所有的试剂在使用前需放置于室温至少1小时,使试剂盒恢复到室温。
2、洗涤液的配制
取1 份10×洗液加入到9份双蒸水中,混匀。配好的液体,应在3天内用完。
3、稀释待检血清。用样品稀释液将待检血清做1∶160(VV)倍稀释(建议在1.5ml微量离心管中加入400μl 样品稀释液,吸取2.5μl 待检样品加入该管中充分混匀)。
4、操作步骤
4.1 加样
包被板上对照和待检样品添加如下所示。
4.2 孵育
将稀释好的样品加入包被板中,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.3 洗涤
甩去孔内液体,用稀释好的洗涤液洗涤包被板,300μl/孔,振荡洗涤3次,拍干。
| 1 | 2 | |||||||||||
| 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |||
| A | P | S1 | S2 | S3 | S4 | |||||||
| B | P | |||||||||||
| C | N | |||||||||||
| D | N | |||||||||||
| E | ||||||||||||
| F | ||||||||||||
| G | ||||||||||||
| H |
(注:“P”为阳性血清对照;“N”为阴性血清对照;S1、S2、S3、S4 为待检血清样品)
4.4 二抗孵育
向各孔中加入兔抗牛IgG 酶标抗体,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.5 洗涤
方法同4.3。
4.6 显色
加入底物显色液,100μl/孔,置室温(15~25℃)下,避光孵育9分钟。
4.7 终止
加入终止液,50μl/孔,轻微震荡混合均匀。
4.8 读数
在加入终止液15分钟内,将包被板置于酶标仪中,用波长450nm(OD450)读数。
4.9 S/P值计算
按照以下计算公式,计算S/P值。
4.10 判定标准
4.10.1 试验结果有效的条件是:阳性血清对照OD450值均应≥0.8,阴性血清对照OD450 值均应<0.1。
4.10.2 待检样品的S/P 值≥0.418时,判定为阳性;待检样品的S/P值<0.418时,判定为阴性。
【注意事项】
(1)所有试剂在2~8℃条件下保存。
(2)贮存时,所有的板条一定要用封口膜密封,防止潮气对包被板的损伤。
(3)不要使底物溶液接触强光和氧化物。取出后,不得再加回瓶中。
(4)仔细阅读说明书。
(5)不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用。
(6)稀释10×洗液时,如发现存在结晶,可置37℃下加热使其溶解后再使用。
(7)注意加样和洗涤过程,以确保试验的准确度,不能用嘴吸液。
(8)被检血清发生腐败时勿用于检测。
(9)检验用器皿必须清洁,操作过程避免与金属类器物接触。
(10)在加样时,应使各孔的加样时间差别小于5 分钟,以保证各孔反应时间一致。
(11)操作过程中使用手套,终止液是硫*(代"酸"),如接触,应用清水迅速冲洗接触部位。
【贮存与有效期】
2~8℃保存,有效期为9个月。
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文献和实验余种。值得注意的是:该公司2009年6月先后通过甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的质量管理体系考核、取得甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的注册受理通知书。2009年6月17日国家食品药品监督管理局医疗器械监管司王宝亭司长、王兰明专员光临我公司并对甲型H1N1流感病毒检测试剂盒文号申报工作进行指导。2009年6月首批428套甲型H1N1流感病毒检测试剂盒配发至全国213个流感检测网络实验室PS:今年甲型流感这一试剂的开发和应用,让金豪公司赚得盆满钵满
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