副结核荧光PCR检测试剂盒(paratuberculosis

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括副结核荧光PCR检测试剂盒(paratuberculosis)厂商在内的动物疫病PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：副结核荧光PCR检测试剂盒(paratuberculosis)厂商
产地：国产|进口
编号：SYA503
规格：48次/盒
品牌：百奥莱博

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胃蛋白酶水溶液(0.4%)   100ml
PY06-007  阪崎肠杆菌显色培养基  1000ml，用于阪崎肠杆菌的快速分离与鉴别
BL1358 非变性组织/细胞裂解液
1,3-二*脲 2-Deoxy-D-glucose 102-07-8
BL1203 Mayer 苏木素染液(免疫组化)
67-03-8 VitaminB1    维生素B1
ARB11729 人游离睾酮(F-TESTO)酶标法分析 Human free testoterone,f-testo ELISA KIT
ARB11081 人肾上腺素能A1A受体(ADRA1A)含量分析 Human adrenergic alpha-1a receptor,adra1a ELISA KIT
蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物片剂(EDTA Free)   1片|10片|20片
1119-34-2 L-Arginine  HCL  L-精*酸盐*(代"酸")盐
ARB11315 人促胰液素/胰泌素(SecretIn)elisa检测 Human secretin ELISA KIT
封闭用脱脂奶粉   25g|50g
BL0954 胶体金标记羊抗大鼠IgG抗体
ARB10989 人系统性红斑狼疮(SLE)酶免分析 Human systemic lupus erythematosus,sle ELISA KIT
PY02-218  叠氮*葡萄糖肉汤基础  250克  
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·炭疽杆菌(BA)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA499
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对炭疽杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
该试剂盒适用于检测发病部位新鲜脓液、渗出物，吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、外周血等样本中炭疽杆菌(BA)DNA，用于炭疽病等疾病的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(50T/Kit)
组份 数量 规格
BA反应液(BA-qPCR MIX) 1管 1mL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
阴性对照(NTC) 1管 250μL/管
BA阳性对照(BA-PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型：新鲜脓液、渗出物、吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、牛外周血。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织：取发病组织约1g，置入1.5mL洁净EP管，立即送检；
6.1.2.2 血液：无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管；
6.1.2.3 体液等液体标本：取0.5-1mL左右，置入1.5mL洁净EP管，立即送检；
6.2 样本前处理：
6.2.1 组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆，匀浆后置于洁净的1.5mL离心管中；
6.2.2 血液样本：直接取200uL抗凝血，转至一洁净的1.5mL离心管中，加入1mL双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm离心5min，弃上清(若沉淀颜色呈红色，请再重复洗涤一次)；
6.2.3 粪便等固体标本：挑取米粒大小粪便，放置于0.5mL生理盐水的离心管中，震荡混匀，13000rpm离心2min，弃上清；
6.2.4 液体标本：取适量标本13000rpm离心2min，弃上清。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BA-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 20µL N×20µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BA-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(BA-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明炭疽杆菌核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明炭疽杆菌核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行炭疽杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明炭疽杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·猪蓝耳病病毒(PRRSV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA405
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪蓝耳病病毒通用特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对猪蓝耳病病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中猪蓝耳病病毒通用的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于猪病料、鼻咽拭子、血液等样本中的猪蓝耳病病毒(PRRSV)特异性检测，适用于猪蓝耳病病毒(PRRSV)感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
猪蓝耳病病毒通用荧光qRT-PCR反应液(PRRSV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PRRSV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(PRRSV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PRRSV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(PRRSV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明PRRSV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PRRSV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行PRRSV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PRRSV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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