北京诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括北京诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒说明书在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：北京诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒说明书
等级：科研试剂
品牌：百奥莱博
规格：48次/盒
产地：国产|进口

北京诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·副猪嗜血杆菌(HPS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA486
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对副猪嗜血杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副猪嗜血杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织、关节液等样本中的副猪嗜血杆菌(HPS)，用于副猪嗜血杆菌(HPS)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
HPS反应液(HPS-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
HPS阳性对照(HPS-PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中；若有关节囊肿，在囊肿表面常规碘酊消毒，用2mL或5mL灭菌注射器穿刺，无菌吸取1-2mL关节渗出液。
6.2 样品前处理
组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；关节渗出液：直接取100μL进行提取。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(HPS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合物	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(HPS-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1）阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2）阳性对照(HPS-PTC)：均产生扩增曲线。
（3）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1）在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副猪嗜血杆菌核酸阳性。
（2）Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副猪嗜血杆菌核酸阴性。
（3）如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4）对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副猪嗜血杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副猪嗜血杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1）初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2）所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3）PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4）样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5）试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


北京诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒说明书关键词：诺如病毒G1型荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博,SYA201

Boc-L-天冬*酸4-环己酯 PDTC 73821-95-1
BTN120931 紫外交联仪 UV Crosslinker
BL1076 预染中低分子量蛋白质
PY02-109  葡萄糖蛋白胨肉汤  250克  
对甲**(代"胺")兰 1,3-Dimethylurea 6578-06-9 
F030641 FITC标记小鼠抗鸡IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Chicken IgY*FITC
F030406 胶体金标记山羊抗小鼠IgG2a抗体 Goat Anti-Mouse IgG2a*GOLD
Tris-甘*酸电泳粉剂(5×)   1L
D-山梨糖 DTAB 3615-56-3
SJ0690 D2000
苏丹Ⅰ PUC18 842-07-9
细菌跨膜蛋白提取试剂盒 Bacterial transmembrane protein extraction kit  50T|100T
BL0888 兔抗鸡IgG免疫血清
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·玉米转基因MON810单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA281
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肠产毒性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA089
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛口蹄疫亚I型抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA662
等级：科研实验专用
规格：192次/盒|480次/盒

·乙型流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA163
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA066
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·偏肺病毒/腺病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA191
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪种布鲁氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA118
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·志贺氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA256
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·季节性H3流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA149
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·尼帕病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA772
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
简介
本试剂盒用一对尼帕病毒特异性引物，结合特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对尼帕病毒 RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中尼帕病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于检测疑似感染病人的静脉血等标本中的尼帕病毒RNA。可用于尼帕病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
尼帕病毒荧光qRT-PCR反应液(NIPAH-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NIPAH-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NIPAH-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(NIPAH-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NIPAH-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NIPAH核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NIPAH核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NIPAH qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NIPAH核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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