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北京百奥莱博科技有限公司
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名称:北京人类小DNA病毒荧光PCR检测试剂盒(B19)现货价格
品牌:百奥莱博
规格:48次/盒
等级:科研试剂
产地:国产|进口
编号:SYA246
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规格:48次/盒
人副流感病毒4型单重荧光PCR检测试剂盒说明书
一、简介:
人副流感病毒(Parainfluenza viruses,PIVs),是一种常常引起儿童下呼吸道感染的单链的RNA病毒,属于副黏病毒。本试剂盒用一对人副流感病毒4 型特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒4 型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探针报告基团为FAM。
二、用途:
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子等临床样品中人副流感病毒4 型的特异性检测。适用于人副流感病毒4 型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
人副流感病毒4型反应液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感病毒4 型阳性对照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月,反复冻融次数不宜超过5次。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Stratagene MX系列,Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照PIV4-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。其中FAM基团检测PIV4,淬灭基团为None。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
(2) 阳性对照(PIV4-PTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
8.3 结果判定
FAM通道:Ct值≤35,人副流感病毒PIV4亚型核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明人副流感病毒PIV4亚型核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·副溶血性弧菌毒素调控基因(TOXR)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA071
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA439
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
本试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA,用于传染性胸膜肺炎放线杆菌的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
本试剂盒用一对传染性胸膜肺炎放线杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对猪传染性胸膜炎放线杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| APP荧光qPCR反应液(APP-qPCR MIX) | 1管 | 720μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 阳性对照(APP-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:
样品的采集与预培养按照《牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定》(SNT1376.1-2004)要求进行。
➤粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
➤病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
二、DNA提取:
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取DNA。
➤培养物:取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μLDNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
➤粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μLDNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
➤其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
三、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(APP-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 15µL | N×15µL |
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(APP-PTC):均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.结果判定
➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明APP核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明APP核酸阴性。
➤如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行APP qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明APP核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
北京人类小DNA病毒荧光PCR检测试剂盒(B19)现货价格关键词:B19,人类小DNA病毒荧光PCR检测试剂盒(B19),百奥莱博,SYA246
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