聚凝胺哪里买

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名称：聚凝胺哪里买
产地：国产|进口
编号：SY0605
英文名：Polybrene (hexadimethrine bromide)
品牌：百奥莱博
聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常用来生产非特异性凝集的红细胞。另外Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

本产品为即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000-1：2000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体查阅相关文献。
注：Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。

操作步骤(仅供参考，具体使用浓度请参考相关文献)

实验1：逆转录病毒感染（Retroviral Infection）
（1）重组逆转录病毒原液的制备：取5ml生长培养基（5%血清）加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45μm滤器过滤。
（2）待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5×105/盘。
（3）病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2ml病毒上清 （或将病毒原液稀释到2ml）感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37℃孵育3-6h。
（4）收集病毒颗粒：加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2：转染
（1）完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%；
（2）孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基- Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml），37℃预热；②添加10ng~10µg质粒轻轻混匀；③加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
（3）去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。
（4）去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
（5）立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。
（6）加入完全培养基到细胞中；
（7）稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期2年。

除聚凝胺哪里买外，我公司正在打折促销以下产品：

·第一条链 cDNA合成试剂盒
编号：SY0290
英文名称：First Strand cDNA Synthesis Kit
规格：50T
本试剂盒是基于Reverse Transcriptase，该酶热稳定性提高，在50℃的半衰期超过240min，且可长时间耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计，进一步增强了模板亲和力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，可获得长达20 kb的cDNA，并且对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5×RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP； Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。

试剂盒组分：

 

组份	规格
RNase free ddH2O	1 ml
5×RT Mix	200 μl
Enzyme Mix*	50 μl
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)	50 μl
Random hexamers (N6)	50 μl
*包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。

储存条件：-20℃，有效期一年。

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增ne*(代"b")ulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。

以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。

引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。

应用实例

1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)	1 μl
or Random Primer	or 1 μl
or Gene Speicific Primers	or 2 pmol
5×RT Reaction Mix	4 μl
Enzyme Mix**	0.8-1μl
模板RNA	Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng

*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。

2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
 

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。






聚凝胺哪里买关键词：SY0605,Polybrene (hexadimethrine bromide),聚凝胺

62669-70-9 Rhodamine 123  罗丹明123
利波腺苷 Phytic acid calcium salt 7724-76-7
BTN100410 超快转染试剂盒 Rapid Transfection Reagent
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维生素K3 K-Lyte 58-27-5
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ARB10156 人S100蛋白(S-100)ELISA检测服务 Human soluble protein-100,s-100 ELISA KIT
F040310 小鼠IgG3抗原 Mouse IgG3
11139-85-8 Chelex 100 sodiu*(代"m")A熬和树脂
BTN130540 二*异香豆素溶液 Dichloroisocoumarin Solution
Caspase 6 活性检测试剂盒   20T|50T|100T
BL0972 小鼠外周血淋巴细胞分离液
H1501 豚鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
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*化乙锭溶液(EB,1mg/ml)   10ml
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β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒(PNP微板法)   50T
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PY01-106  盐*(代"酸")胍  100克  

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