石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒 RNA纯化

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒 RNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒 RNA纯化
规格：50次
产地：国产|进口
英文名：Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit
编号：ALH074
品牌：百奥莱博
本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

产品组分：
裂解液——————15ml
结合液——————25 ml
漂洗液——————10ml
蛋白酶K——————20mg（可选）
RNase-free H2O——————10ml
基因组DNA清除柱和收集管——————50套
RNA吸附柱和收集管室温——————50套

产品特点：
1.完全不使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
6. RNA 纯度及浓度检测：
完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散（smear）带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

储存条件：室温，有效期9个月。

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·长片段Taq PCR MasterMix
编号：ALH253
英文名称：2×Long Taq PCR MasterMix
规格：0.5ml|5ml
本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。可用于长片段DNA扩增和GC含量高，二级结构丰富的片段扩增。

本品使用方便快捷，能避免 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。

产品组分：
Long Taq DNA Polymerase—————————0.05units/μl
MgCl2——————————————————4mM
dNTPs(dATP, dCTP, dGTP,dTTP)———————0.4mM

质量控制：
经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余DNA ；能有效地扩增人基因中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

储存条件：-20℃。


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·基因组DNA去污剂
编号：ALH602
英文名称：DNA eraser
规格：50ml
本品采用非酶法清除RNA样品中的基因组DNA污染。每ml试剂处理～100μg RNA样品。很多用户在提取RNA的时候由于操作因素或者RNA抽提试剂质量问题，造成所得到的RNA样品中混杂基因组污染，在普通或者变性电泳的时候直接肉眼可见程度不一的DNA污染杂带。即使用市售的RNase-free的DNase消化DNA也不容易清除完全，而且常常导致RNA降解。本品不含DNA酶，在强烈抑制RNA酶的条件下彻底清除RNA样品中的污染DNA杂带和蛋白质污染，同时进一步纯化RNA。最后通过异丙醇沉淀回收的RNA纯度极高，完全不影响原有RNA质量和下游应用。

·长片段Taq DNA聚合酶
编号：ALH233
英文名称：Long Taq DNA Polymerase
规格：500U|3000U
本试剂盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶，这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA 为模板高效进行PCR 反应。在人的染色体上可以扩增长度可达27 kb 的DNA 片段，而以λDNA 为模板则可以扩增出高达40 kb 的片段。

产品组分(500U)：
Long Taq DNA Polymerase—————————————500U
10×Long Taq Buffer（2.5mM Mg2+ Plus）——————1ml

储存条件：-20℃。

·DNA消化试剂盒(DNase I)
编号：ALH044
英文名称：DNA digestion kit
规格：1500U
Dnase I中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5"端为磷酸基团，3"端为羟基。DNase I活性依赖于*离子，并能被*离子或二价锰离子激活。*离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。

经过本试剂盒独特的反应液消化后不需要繁琐的*酚/*仿抽提灭活，可直接用于反转录反应，使用起来非常快速方便。

活性单位：37℃ 10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322 质粒DNA 所需的酶量定义为1 个活性单位。
来源：大肠杆菌表达的31kd 重组蛋白。
酶贮存缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5)，10 mM CaCl2，50% (v/v)glycerol。
10×DNase Buffer：100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，25 mM MgCl2，1 mM CaCl2。
纯度：不含其它DNA 内切酶和外切酶，不含RNA 酶。
适用范围：制备不含DNA的RNA样品； RT-PCR反应前RNA 样品中去除基因组DNA 等可能的DNA污染；体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I footprinting 研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nick translatioin)；产生DNA 随机片断文库；细胞凋亡TUNEL 检测中部分剪切基因组DNA 作为阳性对照。

反应体系与条件：
1.在RNAse free 管里面加入以下成分
RNA：＜3μg (＜8μl)
10×DNase Buffer：1μl
DNase I：1μl
RNase free water：Up to 10μl
2. 37℃孵育30分钟。
3. 加1μl EDTA Stopper。
4. 65℃孵育10 分钟，灭活DNase I。
4. 取适量或者全部10μl 的处理过的RNA 直接用于反转录。

注意事项：
每μl DNase I 最多处理不超过3μg RNA。如果需要RNA 较多，需要根据RNA 的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净RNA，可以使用RNA 清洁纯化试剂盒在第2 步后（37℃孵育30 分钟后）直接清洁纯化（不需要加EDTA Stopper 和65℃孵育10分钟的步骤了）。


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核酸沉淀溶液(TCA法)   100ml
ARB13338 牛免疫球蛋白M(IgM)代做ELISA实验 
ARB12370 大鼠肾上腺素(EPI)免费代测 Rat epinephrine/adrenaline,epi ELISA KIT
ARB13475 鸡表皮生长因子(EGF)elisa测定使用说明书 Chicken epidermal growth factor,egf ELISA KIT
2-羟基*乙酸 L-Phenylalaninol 614-75-5
PY02-104  真菌培养基  250克  
F030203 HRP标记小鼠抗人IgG Fab抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG Fab*HRP
001002 马血清
ARB13375 牛病毒性腹泻抗体(BVD Ab)血清中含量检测 
ARB10128 人N*黏蛋白/神经*黏蛋白(N-CAd)含量分析 Human neural-cadherin, n-cad ELISA KIT
植物根茎蛋白提取试剂盒   50T|100T
BL0905 FITC标记羊抗鸡IgG抗体
羟基乙酸* D-Glucose anhydrous 2836-32-0
ARB10514 人白细胞介素32(IL-32)尿液中含量检测 Human interleukin 32,IL-32 ELISA KIT

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