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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
阴凉干燥
- 保质期:
长期
- 英文名:
Protease inhibitor cocktail
- 库存:
563
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括蛋白酶抑制剂混合物(100×)(国产,进口)在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:蛋白酶抑制剂混合物(100×)(国产,进口)
产地:国产|进口
编号:RFT194
规格:1ml|5×1ml
英文名:Protease inhibitor cocktail
本品是一种通用型用于细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物(200mMAEBSF, 30μM Aprotinin, 1 mMBestatin,1.4mME64 and 1mMLeupeptin in DMSO),并提供独立包装的0.1MEDTA。EDTA为单独包装,以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。
细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物,包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶抑制剂以及*基肽酶抑制剂。
本产品使用便捷,通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100×)和0.1MEDTA(100×)加入裂解液中,即可用于常规的细胞或组织蛋白的提取,并有效抑制蛋白降解。
本产品可以有效抑制常规细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性,如丝*酸蛋白酶、*基肽酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆抑制剂,其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似,可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶,作为PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝*酸蛋白酶的竞争性可逆抑制剂;Bestatin是*基肽酶可逆抑制剂;E64是半胱*酸蛋白酶不可逆抑制剂;Leupeptin是丝*酸和半胱*酸蛋白酶可逆抑制剂;EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。
使用方法:
1、本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液,使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如,1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物),混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配,不宜配制后冻存待后续使用。根据需要,0.1M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。
2、待所需的抑制剂添加完毕混匀后,就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。
提示:蛋白酶抑制剂混合物尽量避免反复冻融,第一次使用后,可按照每次使用量分装冻存。
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蛋白酶抑制剂混合物(100×)(国产,进口)关键词:蛋白酶抑制剂混合物,蛋白酶抑制剂混合物(100×),RFT194,Protease inhibitor cocktail
·红细胞裂解液
编号:RFT158
英文名称:Red Blood Cell Lysis Buffer
规格:120ml
本裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。本裂解液经过优化配方,主要有效成分为*化铵,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞或其它有细胞核的细胞。本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解,例如鸟或禽类的红细胞。本裂解液经过无菌处理,处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
使用方法:
一、对于组织细胞样品:
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
3、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
二、对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2、对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。
3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
4、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。
三、对于血液样品:
1、取新鲜抗凝血,400-500g离心5分钟,离心弃上清。
2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注意:对于微量或少量的血液样品,可以在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
四、对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤:
1、每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
3、400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。
注意事项:
1、本裂解液为无菌产品,请注意保持无菌,使用本产品时宜在超净工作台内进行。
2、如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取,在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。
储存条件:4℃,有效期12个月。
蛋白酶抑制剂混合物(100×)(国产,进口)关键词:蛋白酶抑制剂混合物,蛋白酶抑制剂混合物(100×),RFT194,Protease inhibitor cocktail
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