WE0172型新型固定组织基因组DNA提取试剂盒报价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括WE0172型新型固定组织基因组DNA提取试剂盒报价在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：WE0172型新型固定组织基因组DNA提取试剂盒报价
规格：50次
品牌：百奥莱博
英文名：NewPurify FFPE DNA Extraction kit
产地：国产|进口
编号：WE0172
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲*，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。
  从福尔马林固定、石蜡包埋样本中分离的DNA分子量通常低于新鲜或冷冻样本中的DNA。DNA片段化的程度取决于样本类型、储存时间以及固定的条件。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩)	13ml
Buffer GW2(浓缩)	15ml
Buffer EB	10ml
Buffer DS	10ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
离心吸附柱DF及收集管	50套
离心管(L-1.5ml)	50个

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久(＞1年)则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
2、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
3、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，以免影响其活性。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。

操作步骤：

石蜡包埋样本
1、用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μM的薄片。
2、取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μl Buffer DS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56℃孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。
注意：如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。
3、上述管中加入180μl Buffer GTL，涡旋震荡混匀，12000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μl 蛋白酶K 加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。
4、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。

福尔马林等固定液中的样本
1、取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，弃上清，重复3次。
2、上述管中加入180μl Buffer GTL，20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
3、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
4、12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。
注意：如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
3)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
6、将步骤5所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱DF中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
10、将吸附柱置于一个新的1.5ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μlBuffer EB或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司的WE0172型新型固定组织基因组DNA提取试剂盒报价，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
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利波腺苷 Phytic acid calcium salt 7724-76-7
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ARB11730 人富含半胱*酸型酸性蛋白(SPARC)Elisa定量检测 Human secreted protein acidic and rich in cysteine,sparc ELISA KIT
BL1058 多价蛋白胨
马来酰肼*盐 Nickel oxalate dihydrate 689-82-7
PY02-285  高斯氏合成培养基  250克  
碱性蛋白染色液(细胞专用)   2×50ml
67-48-1 *化胆碱 Cholinechloride
BTN131051 十二烷基磺酸*清除剂 SDS Erasol
甘*酸 Hydroxymethyl resin 56-40-6
ARB11731 人富含半胱*酸蛋白61(Cyr61)ELISA代测服务 cyr61 cysteine-rich protein 61 ELISA KIT
ARB12969 小鼠肌酐(Cr)酶联免疫定量检测 Mouse creatinine,cr ELISA KIT
ARB13104 小鼠骨形成蛋白(BMPs)含量检测 Mouse bone morphogenetic proteins,bmps ELISA KIT
WE0172型新型固定组织基因组DNA提取试剂盒报价关键词：NewPurify FFPE DNA Extraction kit,新型固定组织基因组DNA提取试剂盒,WE0172

DNA Marker（250-10000bp） 100次
9048-71-9 葡聚糖凝胶G-50 Sephadex G-50medium
NF-204 羊抗人Alb血清
ARB14260 大鼠丛状蛋白A1(PLXNA1)elisa检测操作说明书 
BL0954 胶体金标记羊抗大鼠IgG抗体
DEPC-PBS溶液(活跃)   500ml
ARB10066 人B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3)Elisa分析 Human b-cell leukemia/lymphoma 3,bcl3 ELISA KIT
001014 大牛血清 100ml
BFD009 猪圆环病毒抗体检测试剂盒
PY02-024  马铃薯葡萄糖肉汤  250克  
玫瑰红酸* Glycolic acid 523-21-7
ARB10716 人色素上皮衍生因子(PEDF)酶标法分析 Human pigment epithelium-derived factor,pedf ELISA KIT
ARB11902 人磷酸烯醇式丙*(代"酮")酸羧激酶(PCK)Elisa分析 Human phosphoenolpyruvate carboxykinase,pck ELISA KIT
CYB161015 山羊IgG(冻干粉)
1-*乙酰胺 Retinoic acid 86-86-2
PY02-326  PALCAM琼脂基础  250克  
N-乙酰-DL-蛋*酸 4-Methylcatechol 1115-47-5
ARB13825 猪Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶标法分析 Porcine collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
SJ0612 UMP Na2   5"-单磷酸鸟苷二*
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·SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
编号：WE0293
英文名称：SDS-PAGE Gel Kit
规格：40-60 gels|200-300 gels
  本试剂盒包括SDS-PAGE凝胶制备所需全*(代"套")试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的变性PAGE凝胶，方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

试剂盒组成：

组份	40-60 gels	200-300 gels
30%Acr-Bis(29:1)	100ml	2×250ml
SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)	100ml	500ml
SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)	50ml	250ml
APS	0.5 g	2.5 g
TEMED	1ml	5 m l

本产品所提供的APS(过硫*(代"酸")铵)为固体粉末，使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水、2.5 g APS加25ml纯水)，将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

注意事项：
1、10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
2、PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。
3、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
4、在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
5、丙*(代"烯")酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
6、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer和纯水在小烧杯或试管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃

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