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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
WB Transfer Buffer,10×
- 库存:
99
- 供应商:
江蓝纯
- 规格:
500ml
Solarbio开发生产的10×电泳转移缓冲液是用于蛋白印迹实验(Western blotting)中湿法以及半干法电泳转膜的缓冲试剂。本产品按常规方法配制而成,为10×浓缩液,不含SDS和甲醇,便于储存、操作简便。
组份浓度:
250mM Tris,1.92 M Glycine
使用说明:
本产品为10×浓缩液,临用前按下述步骤稀释:
1.取100mL 的10×电泳转移缓冲液,加入200 mL无水甲醇混匀。
2.加入蒸馏水或去离子水,定容至1L,混匀后即可使用。
3.新配制的1×电泳转移缓冲液工作液室温可保存两周左右。
4.本产品不含SDS,蛋白分子量较大或者疏水性较强时,为增加转膜效果,可适当添加少量SDS(参考工作浓度为0.025-0.1%)。
注意事项:
1.本产品为高倍浓缩液,环境温度较低时可能会有结晶析出,可加热助溶,待溶解完全后再行稀释使用;密封保存,防止污染。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴手套操作。
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文献和实验过硫酸胺 0.1 g ,加超纯水1.0 mL 溶解后,4 ℃ 保存,保存时间为 1 周。(-20 ℃长期保存) 30% 丙烯酰胺 溶于总体积为 50 mL 的水中,定容至 100 mL。室温保存于棕色瓶。 10× PBS(2L) NaOH 调 pH 值至 7.4,定容至 2 L。保存于室温。 还原型 5×SDS 上样缓冲液 混匀后,分装于 1.5 mL 离心管中,4 ℃ 可保存数周,-20 ℃ 可长期保存。 电泳液缓冲液 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 室温保存,1 次溶液可重复
80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V),以达到更好的浓缩效果,使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳,电泳时间约 2-3 小时。 电转(湿转法) 1) 电泳结束后取出凝胶,在电泳缓冲液中(冷藏的)漂洗数秒。按“三明治”模式,打开电转印夹,每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫,再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸),将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电
1-3 张用转移缓冲液浸泡过的滤纸,逐张叠放,对齐,然后用一玻璃棒作滚筒以挤出所有气泡,必要时可滴加转膜液润湿。 c. 取出浸在转膜液中的凝胶平放于滤纸上。排除所有气泡。 d. 把硝酸纤维素滤膜放在聚丙烯酰胺凝胶上,在硝酸纤维素滤膜与聚丙烯酰胺凝胶之间不留有气泡。 e. 把最后 1-3 张滤纸放在硝酸纤维素滤膜上方,同样须确保不留气泡。其实,用玻棒给点压力很容易排除气泡。 f. 放上另一张或几张海绵垫片,盖上阳极板,夹紧。保证对凝胶有一定的压力。 4)连接电源。我做 90KD 的蛋白
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