一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法RT-PCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：WE0129
规格：100次
  本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制，逆转录和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。UltraRT逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3"端附有一个″A″碱基，可直接用于T/A克隆。

试剂盒组成：

 

组份	100次
UltraRT OneStep EnzymeMix	50μl
2×UltraRT OneStep Buffer	1.4ml
RNase-Free Water	1.5ml

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR 反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件来设计。

使用方法：
1、将RNA模板、引物、OneStep RT-PCR Buffer、UltraRT OneStep RT-PCR EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×UltraRT OneStep Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.4μM
UltraRT OneStep EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	1 pg–1μg
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。

反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	30 min
PCR预变性	95℃	2 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20-30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间根据扩增的片段大小设定，本产品中包含的DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

5、反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

关于一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·抗His标签鼠克隆抗体
编号：WE0336
英文名称：Anti His-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端和内部的六个连续组*酸标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的His-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成(His)6多肽
应用范围：
WB(1：500-5000)
IF/IHC(1：50-200)
ELISA(1：200-20000)
Dot(1：500-5000)
IP(2µg - 5µg)

·100bp DNA Ladder
编号：WE0244
英文名称：Anti His-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100次(500μl)|500次(5×500μl)
  100 bp Ladder由9条DNA片段组成，分别为1,500 bp、1000bp、800 bp、600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、200 bp和100 bp。和本产品已含有1×Loading Buffer的DNA溶液，可取5μl直接电泳，使用十分方便；电泳时500 bp的DNA片段量约为150ng，显示亮带，其他条带的DNA量约为50ng。

注意事项：
1、本产品可直接化冻混匀使用，无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶，以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时，凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大，因此尽量选用质量好的琼脂糖，推荐凝胶浓度为1%-3%，电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大，对短片段DNA分离性能越好；反之，凝胶浓度越小，越有利于长片段DNA的分离。

使用方法：
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽，大于6mm时，须适当增加上样量)，进行电泳。


1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期24个月。


一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)关键词：一步法RT-PCR试剂盒,UltraRT One Step RT-PCR Kit,WE0129


·口腔拭子DNA样本保存管
编号：WE0400
英文名称：Swab DNA Storage Tube
规格：200μl×20支
本产品采用医疗专用的聚*脂海绵为原材料，具有吸液性强、柔软洁净、发尘量低等优点。采样拭子头可折断，使用方便。采用的物料对微生物无毒害，能大量地增加样本的采集、释放量，增强样本送检期间的保存效果。能够常温保存口腔拭子DNA长达12个月，其获得的DNA可用来完成各种基因检测及分析实验，如qPCR、NGS、SNP分析。为运输和存储提供方便，并减低其成本。

使用方法：
1．取样前清洁双手，用清水漱口1-2次，去除口腔中的食物残渣，咽尽口腔中剩余的清水。
2．撕开采样棉签外包装。
3．将棉签伸进口腔内，在内侧颊粘膜处反复擦拭20次以上，至棉头已经被唾液充分浸润(应无食物残渣等异物粘附)。
4．打开样本采集管盖，将采样后的棉签放入样本采集管内，沿手柄上的折痕折断手柄。
5．随即盖上样本采集管，完成样品取样。



·2×Taq MasterMix(含染料)
编号：WE0102
英文名称：2×Taq MasterMix(With Dye)
规格：1ml|5ml|25ml
  Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液可根据使用量的多少调节扩增产物的特异性和得率，使操作更加简单快捷，并可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使扩增产物得率高，重复性强，稳定性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml	25ml
2×Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


储存条件：-20℃，避免反复冻融。


一步法RT-PCR试剂盒 核酸扩增(PCR)关键词：一步法RT-PCR试剂盒,UltraRT One Step RT-PCR Kit,WE0129

F030310 胶体金标记羊抗乙肝表面抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBsAg*GOLD
ARB12815 小鼠乙酰胆碱(ACH)酶免分析 Mouse acetylcholine,ach ELISA KIT
PY01-129  麦芽浸粉  250克  
58-61-7 腺苷 Adenosine
ARB10257 人二*嘧啶酶样2(DPYSL2)尿液中含量检测 Human dihydropyrimidinase-like 2,dpysl2 ELISA KIT
BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
*芴酮 TPPTS 975-17-7
F030706 BIOTIN标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*BIOTIN
BL0931 RBITC标记兔抗猴IgG抗体
ACK红细胞裂解液 ACK Lysis Buffer  100ml|500ml
ARB12863 小鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)免费代测 Mouse terminal complement complex c5b-9,tcc c5b-9 ELISA KIT
牛磺胆酸* Benzimidazole 145-42-6或345909-26-4
ARB12654 大鼠催乳素(PRL)Elisa方法检测 Rat prolactin,prl ELISA KIT
PY04-078  新生霉素  0.25mg/支×10支  每支添加于95ml CIN-I培养基基础中，用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离培养
BTN130875 葡激酶 Staphylokinase
HC0281 八道整支灭菌移液器
CYB161053 马IgG(液体-pH7.2PBS)
ARB10616 人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)ELISA代测服务 Human fibrinoPeptide b,fpb ELISA KIT
ARB11156 人周期素依赖性激酶2(CDK-2)检测服务 Human cyclin-dependent kinase 2,cdk-2 ELISA KIT
ARB14146 小鼠转化生长因子β(TGF-β)免费代测 

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