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- 百奥莱博
- 北京
- WE0162-UJI
- 2025年07月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
PlaPure Mini Extraction Kit
- 库存：
512
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括高纯质粒小提试剂盒北京厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。
名称：高纯质粒小提试剂盒北京厂家
产地：国产|进口
英文名：PlaPure Mini Extraction Kit
品牌：百奥莱博
规格：50次|200次
编号：WE0162
本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer P1 | 15ml | 60ml |
| Buffer P2 | 15ml | 60ml |
| Buffer N3 | 20ml | 80ml |
| Buffer PB | 10ml | 35ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 6ml | 25ml |
| Buffer EB | 10ml | 30ml |
| RNase A(10mg/ml) | 150μl | 600μl |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤：
1、取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，13000rpm(~～16200×g)离心30秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4-6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8-10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13000rpm离心5分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DM中，13000rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm离心30秒。
7、向吸附柱中加入400μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
8、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入50-100μl Buffer EB，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时， Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。
储存条件：室温(15～30℃)。
我公司的高纯质粒小提试剂盒北京厂家，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
·RNA酶抑制剂
编号：WE0223
英文名称：Rnasin
规格：30μl(1200U)
本品为从人胎盘中提取得到，分子量约50 KDa的广谱型RNase抑制剂。RNasin能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体从而使RNase失活，而不抑制RNase H、S1核酸酶、SP6、T7或T3 RNA 聚合酶、AMV或M-MLV反转录酶、Taq DNA聚合酶、RNaseT1等酶的活性，不影响后续的反转录及翻译过程。广泛的应用于RNA方面的研究，如RT-PCR，cDNA合成，mRNA的保护，体外转录和体外翻译，制备RNase-Free的抗体，原位杂交和mRNA定位等。
储存缓冲液：HEPES-KOH(pH7.6)20 mM， KCl 50 mM， DTT 8mM ， Glycerol 50%。
活性定义：1个活性单位(U)指抑制50%5ng RNAse A中的苷2"，3"-环磷酸发生水解所用的酶量。
主要用途：cDNA合成、体外翻译、体外转录、RNA 扩增、RNA纯化和储存。
纯度：
1、300 U的Rnasin和1μg的λ DNA-Hind Ⅲ分解物在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2、300 U的 Rnasin 和1μg的超螺旋pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3、100 U的Rnasin 和1μg的16 S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
4、SDS-PAGE：在分子量50 KDa处是单一带。
注意事项：
1、本产品避免反复冻融，长期储存请与-70℃存放。
2、建议使用终浓度为1 U/μl。
储存条件：-20℃
高纯质粒小提试剂盒北京厂家关键词：WE0162,高纯质粒小提试剂盒,PlaPure Mini Extraction Kit
·快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)
编号：WE0142
英文名称：BaFaSYBR Mixture(Low ROX)
规格：5ml
本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。
产品组成：
| 组份 | WE0141-5ml | WE0142-5ml | WE0143-5ml |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
| 50×Low ROX | - | 200μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 200μl |
| ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系：
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 20 s | |
| 变性 | 95℃ | 3 s | 35-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 s | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
| 60℃ | 1 min | ||
| 95℃ | 15 s | ||
| 60℃ | 15 s |
注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
储存条件：-20℃，避免反复冻融
高纯质粒小提试剂盒北京厂家关键词：WE0162,高纯质粒小提试剂盒,PlaPure Mini Extraction Kit
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吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。 3、性能参数 灵敏度高（0.5ng/ml） 4、标本要求 （1）标本类型：血清，血浆。 （2）标本采集：见标本采集手册 （3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。 5、容器和添加剂类型 6、试剂 （1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。 （2）试剂生产厂家
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