去内毒素质粒小提中量试剂盒

去内毒素质粒小提中量试剂盒产品介绍
本公司的核酸提取和纯化系列产品可以从多种来源和复杂成分样本中提取纯化到高质量的核酸。DNA系列产品基于DNA-only硅胶膜纯化柱和独特配方试剂可以从多种样本中纯化得到高质量DNA。
General Plasmid Mini Kit采用DNA-only纯化柱技术及高效的SDS裂解配方，可以在20分钟内从细菌中获得高质量的质粒DNA。DNA-only纯化柱的质粒DNA最大结合能力为80μg DNA，实际提取获得的质粒DNA量与菌液体积、质粒拷贝数（高拷贝、低拷贝）、菌株、培养条件等因素相关。

试剂盒应用
该试剂盒适用于纯化革兰氏阴性菌中的质粒DNA。

质粒DNA的应用
General Plasmid Mini Kit纯化获得的质粒DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：转化、酶切、PCR、文库构建、测序（建议使用ddH2O洗脱质粒DNA）。

质粒DNA提取得率
提取的质粒DNA量与细菌培养浓度、拷贝数、菌株、培养条件等因素有关。



去内毒素质粒小提中量试剂盒试剂盒内容
♦ Buffer S1：提供细菌裂解环境。
♦ Buffer S2：裂解细胞，变性蛋白和DNA。
♦ Buffer S3：沉淀蛋白和基因组DNA，并提供质粒DNA上柱环境。
♦ Buffer PW：去除质粒DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
♦ Buffer WB：去除质粒DNA中的残留的盐离子。
♦ Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的质粒DNA。
♦ DNA-only Column：特异吸附裂解产物中的质粒DNA。
 

产品信息

操作流程

注意事项：（请务必在使用试剂盒前仔细阅读注意事项）
 菌液使用量不宜过多。
 试剂盒使用前，请务必检查 Buffer WB2 是否按说明添加了无水乙醇。Buffer WB2在使用前分别添加 60ml 无水乙醇(DE-01001)、120ml 无水乙醇(DE-01002)300ml无水乙醇(DE-01003)。
 使用前，仔细检查 Buffer S2 和 Buffer S3 中是否有沉淀析出，若有沉淀析出，请将其置于 37℃溶解，混匀后再使用。
 洗脱体积：小量提取不应少于 50μl，中量提取不应少于 100μl，否则会影响质粒 DNA产量。
 所有离心步骤均为使用台式离心机常温(15-25℃)离心。
 切记不要在任何 Buffer 中添加 RNA 酶。
 所有实验步骤均在常温(15-25℃)进行。

实验材料和设备
 培养 16-20hr 的转化细菌 1-15ml。
 1.5ml 或 2ml 无菌离心管(Plasmid Mini Kit)；15ml 无菌离心管(Plasmid Mini Kit II)。
 无水乙醇。
 台式离心机(≥16,000×g)、移液器、涡旋仪等。
安全性
 本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床医疗、食品及化妆品等用途。
 使用化学品时，穿戴合适的实验服，手套，防护眼镜等。
 Buffer S2 含有氢氧化钠：腐蚀性，刺激性。
 Buffer S3 含有乙酸：刺激性。
 Buffer PW 含有胍盐：变性剂，刺激性。
 Buffer WB2 含有无水乙醇：易燃。


去内毒素质粒小提中量试剂盒操作步骤
小提小量操作步骤
使用前请先在 Buffer WB2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 取 1-5ml 培养 16-20hr的菌液，加入离心管中，12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，尽量吸净培养基（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
注意：建议使用 2ml 离心管。与 1.5ml 离心管相比，采用 2ml 离心管，在后续操作中将更容易使细菌沉淀与 Buffer S1 混匀。
2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入 Buffer S1，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌
沉淀。
2a：菌液体积≤2ml，向留有菌体沉淀的离心管中加入 130μl Buffer S1。
2b：菌液体积>2ml，向留有菌体沉淀的离心管中加入 200μl Buffer S1。
注意：如果有未完全混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3. 向离心管中加入 Buffer S2，轻柔地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。
3a：菌液体积≤2ml，向离心管中加入 130μl Buffer S2。
3b：菌液体积>2ml，向离心管中加入 200μl Buffer S2。
注意：轻柔地混合。不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA，造成提取的质粒中混有基因组 DNA 片断。此时菌液应变得黏稠，所用时间不应超过 5min，以免质粒受到破坏。菌体不宜过量，否则会造成菌体裂解不完全。
4. 向离心管中加入 Buffer S3，立即上下颠倒 6-8 次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，室温静置 1min。13,000rpm（~16,000×g）离心 5min。离心后离心管底部会形成沉淀。
4a：菌液体积≤2ml，向离心管中加入 300μl Buffer S3。
4b：菌液体积>2ml，向离心管中加入 450μl Buffer S3。
注意：Buffer S3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。静置有助于离心后絮状沉淀集中于管底。
5. 将上清液用移液器转移到离心柱中（将离心柱放入收集管中），注意尽量不要吸到沉淀。
注意：如果吸取的上清液中还有微小白色沉淀，可将其转移至新的离心管中再次离心后取上清，加入离心柱中。
6. 12,000rpm(~13,400×g) 离心 1min，弃掉收集管中的废液。
7. 向离心柱中加入 500μl Buffer PW，3,000rpm(~900×g) 低速离心 1min。弃掉收集管中的废液。
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8. 向离心柱中加入 700μl Buffer WB2（请再次检查 Buffer WB2 是否已添加了无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，弃掉收集管中的废液。
9. 重复步骤 8 一次。
10.将离心柱放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)空管离心 2min，去掉离心柱中残余的 Buffer WB。
注意：Buffer WB2中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11.将离心柱放到一个干净离心管中，向硅胶膜中间位置滴加 50-100μl Buffer EB，室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 1min 收集 DNA 溶液。
注意：为了提高DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心柱中，重复步骤11。洗脱体积不应小于50 μl，体积过少影响质粒DNA产量