高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销*(代"售")的品牌：百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销*(代"售")
英文名：eECL Western Blot Kit
品牌：百奥莱博
规格：50ml|250ml
编号：WE0308
  高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，在HRP的催化下产生高强度的信号，能够检测pg级别的抗原。灵敏度高、发光信号强烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

试剂盒组成：

 

组成	50ml	250ml
eECL-A(Luminol Enhancer)	25ml	125ml
eECL-B(Peroxide)	25ml	125ml

注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。

操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将eECL-A和eECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
 

问题	可能原因	解决方法
胶片反相(白色条带，黑色背景)	系统中HRP过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号	发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低	稀释HRP标记物至少10倍以上
	抗原/抗体量不够	增加抗原/抗体使用量
	蛋白转移率低	优化转移系统
高背景	系统中HRP 过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
	封闭不足	优化封闭程序
	封闭试剂选择不当	选择另一种封闭试剂
	冲洗不充分	增加冲洗时间，次数
	曝光过度	减少曝光时间
	抗原/抗体浓度过高	降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状	蛋白转移失败	优化转移过程
	膜未平衡	按照说明书处理膜
	胶片与膜之间有气泡	曝光前去除所有气泡
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短)	系统中HRP过多	稀释HRP标记物
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常)	一抗用量过多	进一步稀释一抗
	SDS 导致非特异结合	在实验过程中避免使用SDS

储存条件：2～8℃，避光保存

关于高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销*(代"售")的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·T4 DNA连接酶
编号：WE0239
英文名称：T4 DNA Ligase
规格：100U|500U
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。


高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销*(代"售")关键词：WE0308,高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒,eECL Western Blot Kit


·Babuddy超保真DNA聚合酶
编号：WE0109
英文名称：Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
规格：100U
  Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase，其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30 sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20kb。

  本产品中包含两种PCR缓冲液，经过优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂DMSO使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。

  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。

产品特点
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

组份	20μl×250次(100 U)
Babuddy DNA Polymerase，2U/μl	50μl
5×Babuddy HF Buffer	1.5ml
5×Babuddy GC Buffer	1.5ml
100% DMSO	0.5ml
50 mM MgCl2	1.5ml

注意：本产品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM*离子。

活性定义：
在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、核酸内切酶活性检测：50μl反应体系中，10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19质粒于37℃温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
2、7.5 kb基因组DNA PCR扩增：50μl反应体系，1×Babuddy HF Buffer，50ng基因组DNA，1 U Babuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR扩增：50μl反应体系，5×Babuddy HF Buffer，10ng λDNA，1 UBabuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
5×Babuddy HF Buffer	4μl	10μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	1.6μl	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
100% DMSO	0.6μl	1.5μl	3%
Babuddy DNA Polymerase	0.2 μl	0.5μl	1 U/50μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

注意：
1)对于复杂模板或高GC含量的模板，请使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可选步骤：对于复杂模板，如高GC含量、带有复杂二级结构的序列，可加入本产品中提供的100%DMSO或其他PCR添加物，以提高扩增效率，推荐终浓度为3%，也可按照2%的浓度递增优化。由于DMSO可以降低引物的Tm值，因此若DMSO使用浓度很高，需降低退火温度。

a.模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
c.*离子：*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已经含有7.5 mM*离子，可根据dNTP浓度、引物和模板来调整，由此优化反应体系。若引物或模板中有螯合剂(如EDTA)存在，则应提高*离子浓度。若需要对*离子浓度进行优化时，可使用本产品中提供的MgCl2按照0.5 mM浓度梯度逐步调整。
d.dNTPs：反应体系中dNTPs的浓度一般为每种200μM，使用本品时，不推荐使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的浓度：Babuddy酶推荐的使用浓度为1 U/50μl 反应体系，可在0.5-2 U/50μl 反应体系之间优化酶的浓度。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒销*(代"售")关键词：WE0308,高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒,eECL Western Blot Kit

ARB12474 大鼠前心*肽(Pro-ANP)ELISA代测服务 Rat pro atrial natriuretic Peptide,pro-anp ELISA KIT
ARB13962 猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)Elisa定量检测 Porcine oxidized lowdensity lipoprotein,oxldl ELISA KIT
ARB13808 豚鼠降*素基因相关肽(CGRP)含量检测 Guinea pig calcitonin gene related Peptide,cgrp ELISA KIT
BL1286 10×PBST
*唑西林* 5-BrU 1173-88-2
BTN80810 一站式SDS-PAGE电泳套装 One-Stop SDS-PAGE Pack
柠檬酸—柠檬酸*缓冲液(1mol/L,pH6.0)   100ml|500ml
5-核黄素磷酸*盐二水物 L-Tyrosine disodiu*(代"m") salt 6184-17-4
亚硫基二乙酸 Actidione 123-93-3
乙酸*缓冲液(0.1mol/L,pH3.6-5.6)   500ml
丙*(代"烷")磺酸*一水物 Disodiu*(代"m") zinc ethylenediamin*(代"e")tetraacetate tetrahydrate 304672-01-3
ARB12672 大鼠雌三醇(E3)酶免分析 Rat estriol,e3 ELISA KIT
ARB13844 猪口蹄疫(FMD)酶标法分析 
ARB11618 人羟脯*酸(Hyp)含量测试 Human hydroxyproline,hyp ELISA KIT
细胞周期检测试剂盒   20T|50T|100T
ARB10701 人多巴色素异构酶(DT)ELISA检测服务 Human dopachrome tautomerase,dt ELISA KIT
BL1374 SOB液体培养基(干粉)
1239-45-8 *化乙锭 Ethidium Brmide
BL1336 通用引物 ITS5
BTN100881 SDS溶液(10%,电泳级) SDS Solution,EG
ARB12038 大鼠一氧化*(代"氮")(NO)检测服务 Rat nitric oxide,no ELISA KIT

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